بررسی ریزازدیادی گل آلسترومریا رقم fuego با استفاده از جنین زایی سوماتیک و اندام زایی : پایان نامه ارشد مهندسی کشاورزی علوم باغبانی

کشور عزیزمان ایران با توجه به تنوع اقلیم ، آب و هوای مطبوع و اراضی وسیعی که در اختیار دارد در صورت مدیریت در عرصه کشاورزی میتواند یکی از قطب های بلامنازع کشاورزی دنیا باشد و با پرورش دانش آموختگان خبره در گرایش های مختلف رشته کشاورزی میتوان به این مهم نایل آمد.دیجی لود در ادامه به معرفی پایان نامه های کارشناسی ارشد رشته کشاورزی میپردازد. پایان نامه حاضر با عنوان” بررسی ریزازدیادی گل آلسترومریا رقم fuego با استفاده از جنین زایی سوماتیک و اندام زایی” با گرایش علوم باغبانی و با فرمت Word (قابل ویرایش) تقدیم شما دانشجویان عزیز میگردد.

چکیده بررسی ریزازدیادی گل آلسترومریا رقم fuego با استفاده از جنین زایی سوماتیک و اندام زایی:

گل آلسترومریا با نام علمی(Alstroemeria psittacina)از خانواده ((Alstroemeriaceaeیکی از مهم ترین گلهای شاخه بریده در دنیا بوده که اخیراً برای تولید گلهای گلدانی و باغچه ای نیز استفاده می شود. این تحقیق به منظور بررسی و معرفی محیطی مناسب جهت ریزازدیادی و تولید کالوس های جنینی و جنین زایی سوماتیکی آلسترومریا انجام شد.

در بخش ریزازدیادی، جوانه های جانبی و انتهایی ریزوم به طول   mm 6-4 از رقم فیگو پس از گندزایی بر روی محیط کشت MS حاوی 30 گرم در لیتر ساکارز، 7 گرم در لیتر آگار و غلظت های مختلف BAP و NAA کشت شدند و به فواصل هر 3 هفته واکشت شدند. جوانه های کشت شده از هفته سوم شروع به رشد نمودند. بیشترین تعداد شاخساره از محیط کشت حاوی 1 میلی گرم در لیتر BAP و 2/0 میلی گرم در لیتر NAA حاصل شد.

همچنین نتایج نشان داد که با افزایش غلظت BAP به دلیل کاهش اثر غالبیت انتهایی، طول شاخساره ها کاهش یافته است. همچنین مقدار کم NAA جهت رشد شاخساره و ریزوم های اولیه ضروری بوده است. از آنجایی که در تکثیر آلسترومریا، تعداد ریزوم تکثیر یافته از تعداد شاخساره مهم تر می باشد، درنتیجه محیط کشت حاوی صفر میلی گرم در لیتر BAP و 1  میلی گرم در لیتر NAA با میانگین تعداد 3 ریزوم و 5 ریشه در هر ریزنمونه بهترین تیمار برای ریزازدیادی آلسترومریا رقم فیگو بوده است.

آزمایشات جنین زایی سوماتیک نیز در محیط کشت MS انجام شد. در این محیط کشت به منظور به دست آوردن کالوس های جنین زا، ریزنمونه های رویشی (گره و میانگره) و هورمون اکسین NAA در دو سطح (غلظت 1 و 2 میلی گرم در لیتر) همراه با تنظیم کننده رشد سایتوکنین BAP در دو سطح (غلظت 0 و 5/0 میلی گرم در لیتر) مورد استفاده قرار گرفت. بهترین ریزنمونه جهت بدست آوردن کالوس های جنین زا، گره ها بودند. ریزنمونه های میانگره اگرچه مستعد تولید کالوس های جنینی بودند اما در مقایسه با گره ها دارای درصد کالوس زایی پائین تری بودند. بهترین تیمار هورمونی برای بدست آوردن کالوس های جنین زا، 2 میلی گرم در لیتر NAA بوده است. کالوس های به دست آمده، 3 ماه پس از کشت جهت پرآوری به محیط کشت MS تغییر داده شده حاوی 5 میلی گرم در لیتر پیکلرام منتقل شدند. جنین زایی سوماتیک و باززایی گیاه از این جنین ها، پس از انتقال کالوس های جنینی توده ای به محیط کشت باززایی حاوی غلظت های مختلف BAP صورت گرفت. بیشترین گیاهچه از محیط کشت MS حاوی 5/0 میلی گرم در لیتر BAP حاصل شد.

مقدمه تحقیق جنین زایی سوماتیک :

فناوری کشت بافت و سلول در دومین انقلاب سبز، که بر اساس تغییر ژن و دستکاری ژنتیکی برای بهبود کیفیت و کمیت محصولات پایه گذاری شد، نقش کلیدی دارد. کشت بافت و سلول گیاهی به روشی گفته می‌شود که اجزای مختلف گیاه شامل سلول، پروتوپلاست، جنین، بافت، اندام و غیره در شرایط آزمایشگاهی و به طور کامل سترون روی یک محیط غذایی قرار می‌گیرند و در شرایط محیطی مناسب نگهداری می‌شوند. این روش در سطح کم وسعت در مقایسه با کشت های مزرعه‌ای و با استفاده از محیط غذایی مشخص و عاری از هر گونه آلودگی صورت می‌گیرد .

روش‌های اصلی برای ایجاد کالوس‌دهی و باززایی، شامل روش‌هایی است که هم کاربرد تجاری مستقیم دارند و به همان اندازه نیز امکان پژوهش‌های پایه‌های ژنتیکی و بیو شیمیایی در سلول را فراهم می‌آورند. این روش‌ها شامل انواع کشت بافت و سلول‌های گیاهی، مانند بساک، تخمک (تخمدان)، بذر، ساقه، برگ، کالوس، جداسازی پروتوپلاست و امتزاج آنها، انتخاب سلول، کشت مریستم و جوانه، و همچنین تغییر ژنتیکی سلول‌ها و گیاهان است (سید طباطبایی و امیدی، 1388).

امروزه از تکنیک‌های کشت بافت در سراسر جهان به منظور تولید بسیاری از گیاهان با اهداف گوناگون استفاده می‌شود. این تکنیک‌ها دامنه وسیعی از روش‌های مختلف را بسته به محیط‌های کشت مورد استفاده، ریزنمونه مورد نظر، چگونگی انتقال از فازهای مختلف فرآیند و … را در بر می‌گیرند.

یکی از مهم‌ترین روش‌های کشت بافت، ریزازدیادی است که به منظور تکثیر انبوه گیاهان در زمانی کوتاه به کار می‌رود. در این روش از قسمت‌های مختلف گیاه ریزنمونه تهیه شده و با استفاده از ترکیبات غذایی و هورمونی مناسب مستقیماً به فاز باززایی هدایت می‌شوند. در واقع این تکنیک می‌تواند جایگزینی برای روش‌های سنتی تکثیر غیر جنسی در بسیاری از گیاهان باشد.

یک روش بسیار پرکاربرد ریزازدیادی کشت مریستم و نوک ساقه است. مریستم شامل سلول‌های به سرعت در حال تقسیم است، از این رو از این تکنیک برای تولید تجاری گیاهان و همین طور تولید گیاهان عاری از ویروس به طور وسیعی استفاده می‌شود. گیاهان به دست آمده از این طریق، پایداری ژنتیکی زیادی نشان می‌دهند، از این رو برای انجام تحقیقات بیوتکنولوژیکی بسیار مناسب هستند.

 ضرورت و اهمیت اجرای تحقیق جنین زایی سوماتیک

با توجه با اینکه تکثیر این گیاه به روش‌های سنتی (تقسیم ریزوم) پرهزینه، زمانبر، کم بازده و باعث گسترش بیماری‌های ویروسی می شود، تکثیر از طریق کشت بافت بسیار اهمیت پیدا می‌کند. در حال حاضر نیز گلکارانی که در داخل کشور مشغول به کشت و پرورش آلسترومریا می‌باشند با هزینه‌های بسیار بالایی از سایر کشورها خصوصاً هلند مبادرت به وارد کردن ریزوم می‌کنند که خود باعث خروج مقدار زیادی ارز از کشور می‌شود (گزارش سالیانه مرکز ملی تحقیقات گل و گیاهان زینتی ایران، 1388). این موارد ضرورت تحقیق در زمینه ریزازدیادی آلسترومریا را نشان می دهد. علاوه بر تکثیر آلسترومریا از طریق کشت مریستم در شرایط درون شیشه، جهت افزایش این گیاه در سطح انبوه کاربرد جنین‌های سوماتیکی نیز بسیار با اهمیت می‌باشد. علاوه بر کاربرد جنین‌های سوماتیک در تکثیر هم گروه‌ها، در جهت تولید بذور مصنوعی و اصلاح گیاهان استفاده‌های بسیار می شود. اخیراً پیشرفت در ژنتیک مولکولی و بیوتکنولوژی برای اصلاح و باززایی گیاهان ابزار نیرومندی برای اصلاح محصولات ایجاد کرده است. بنابراین یک سیستم کشت با کارایی مطلوب جهت باززایی آلسترومریا به نظر می رسد. با این حال تا کنون مطالعه‌ای در زمینه جنین‌زایی سوماتیک گل السترومریا و تکثیر این گل از طریق کشت بافت در ایران انجام نشده است، بنابراین هدف از این تحقیق بررسی و معرفی محیطی مناسب جهت ریزازدیادی و جنین‌زایی سوماتیک این گل می‌باشد.

فهرست مطالب

چکیده 1

فصل اول: مقدمه و کلیات

1-1- مقدمه. 3

1-2- تاریخچه آلسترومریا 4

1-3- مشخصات گیاه‌شناسی آلسترومریا 6

1-4- روش‌های تکثیر آلسترومریا… 8

1-4-1- تکثیر جنسی………….. 8

1-4-2- تکثیر از طریق رویشی.. 8

1-4-3- تکثیر از طریق کشت بافت.. 9

1-5- اهمیت و جایگاه آلسترومریا به عنوان یک گل شاخه بریده 10

1-6-کشت بافت.. 11

1-6-1- محیط کشت و مواد غذایی مورد نیاز برای رشد. 11

1-6-1-1- مواد غذایی غیر آلی.. 11

1-6-1-2- مواد غذایی آلی.. 12

1-6-1-3- تنظیم کننده‌های رشد گیاهی.. 13

1-6-2- زغال فعال. 14

1-6-3- ریزازدیادی.. 15

1-6-4- کشت مریستم‌. 16

1-7- ضرورت و اهمیت اجرای تحقیق. 19

فصل دوم :مرور منابع

2-1- انتخاب ریزنمونه و ترکیب محیط کشت.. 21

2-2- دما و نور. 26

2-3- جنین زایی سوماتیکی.. 27

فصل سوم :مواد و روش‌ها

3-1- تهیه مواد گیاهی.. 32

3-2- ریزازدیادی.. 32

3-2-1- گند زدایی ریزوم‌ها 32

3-2-2- محیط کشت تکثیر. 33

3-2-3- تهیه و کشت ریزنمونه. 34

3-2-4- طرح آزمایشی و تجزیه و تحلیل آماری.. 34

3-3- جنین زایی سوماتیک… 36

3-3-1- تهیه محیط القاء کالوس… 36

3-3-2- ضدعفونی نمونه‌ها 36

3-3-3- تهیه و کشت ریزنمونه گره و میانگره 37

3-3-4- محیط پرآوری کالوس… 37

3-3-5- محیط کشت باززایی.. 38

3-3-6- طرح آزمایش و تجزیه و تحلیل آماری.. 38

فصل چهارم :نتایج و بحث

4-1- نتایج حاصل از آزمایشات صورت گرفته بر روی ریزازدیادی آلسترومریا رقم Fuego. 40

4-1-1- نتایج حاصل از اثرات سطوح مختلف BAP و NAA بر روی تعداد جوانه. 45

4-1-2- نتایج حاصل از اثرات سطوح مختلف BAP و NAA بر روی تعداد شاخه. 47

4-1-3- نتایج حاصل از اثرات سطوح مختلف BAP و NAA بر روی طول شاخه. 49

4-1-4- نتایج حاصل از اثرات سطوح مختلف BAP و NAA بر روی تعداد ریشه. 51

4-1-5- نتایج حاصل از اثرات سطوح مختلف BAP و NAA بر روی طول ریشه. 54

4-1-6- نتایج حاصل از اثرات سطوح مختلف BAP و NAA بر روی تعداد ریزوم. 56

4-2- نتایج حاصل از آزمایشات جنین زایی سوماتیک صورت گرفته در محیط کشت MS. 59

4-2-1- مرحله القاء کالوس… 60

4-2-1-1- اثر نوع ریزنمونه بر کالوس زایی.. 61

4-2-1-2- اثر BAP بر کالوس زایی.. 62

3-2-1-3- اثر NAA بر کالوس زایی.. 63

4-2-1-4- اثر متقابل نوع ریزنمونه و نوع BAP بر کالوس زایی.. 64

4-2-1-5- اثر متقابل نوع ریزنمونه و نوع NAA بر کالوس زایی.. 64

4-2-1-6- اثر متقابل نوع BAP و نوع NAA بر کالوس زایی.. 65

4-2-1-7- مقایسه تیمارهای اعمال شده با تیمار شاهد. 66

4-2-2- پرآوری کالوس… 66

4-2-4-  بحث و نتیجه گیری.. 67

منابع. 69

فهرست جداول         

جدول 3-1- غلظت عناصر در محیط کشت MS.. 33

جدول 4-1- تجزیه واریانس اثر سطوح مختلف BAP و NAA روی صفات اندازه گیری شده در کشت جوانه ریزوم آلسترومریا رقم Fuego  42

جدول 4-2- مقایسه میانگین اثر سطوح مختلف BAP بر صفات اندازه گیری شده در کشت جوانه ریزوم آلسترومریا رقم Fuego. 43

جدول 4-3- مقایسه میانگین اثر سطوح مختلف NAA بر صفات اندازه گیری شده در کشت جوانه ریزوم آلسترومریا رقم Fuego. 43

جدول 4-4- مقایسه میانگین اثر سطوح مختلف NAA و BAP بر صفات اندازه گیری شده در کشت جوانه ریزوم آلسترومریا رقم Fuego  44

جدول 4-5- تجزیه واریانس اثر نوع ریزنمونه، BAP و NAA روی صفات اندازه گیری شده در جنین زایی رویشی آلسترومریا رقم Fuego  61

جدول 4-6- مقایسه میانگین اثر نوع ریزنمونه بر صفات اندازه گیری شده در جنین زایی رویشی گل آلسترومریا 62

جدول 4-7- مقایسه میانگین اثر BAP  بر صفات اندازه گیری شده در جنین زایی رویشی گل آلسترومریا 63

جدول 4-8- مقایسه میانگین اثر NAA بر صفات اندازه گیری شده در جنین زایی رویشی گل آلسترومریا 63

جدول 4-9- مقایسه میانگین اثر متقابل نوع ریزنمونه و BAP بر صفات اندازه گیری شده در جنین زایی رویشی گل آلسترومریا 64

جدول 4-10- مقایسه میانگین اثر متقابل نوع ریزنمونه و NAA بر صفات اندازه گیری شده در جنین زایی رویشی گل آلسترومریا 65

جدول 4-11- مقایسه میانگین اثر متقابل BAP و NAA بر صفات اندازه گیری شده در جنین زایی رویشی گل آلسترومریا 65

فهرست اشکال

شکل 1-1- نمونه‌هایی از گل آلسترومریا 5

شکل 1-2- گل آلسترومریا رقم Fuego 5

شکل 1-3- شمایی از گل آلسترومریا 6

شکل 1-4- شمای از شکل ریزوم که در آن ریشه‌ها و شاخه‌های هوایی منشا می‌گیرند 7

شکل 4-1- نحوه تهیه ریزنمونه نوک ریزوم (الف)، رشد ریزنمونه‌ها و تولید شاخساره در هفته چهارم (ب) و ریشه‌دار شدن گیاهچه‌ها در هفته ششم (ج 41

شکل 4-2- نمایی از کشت ریزنمونه گل آلسترومریا 42

شکل 4-3- تشکیل کالوس توده‌ای (الف) و کروی (ب) در گل آلسترومریا 60

فهرست نمودارها

نمودار 4-1- مقایسه میانگین اثر سطوح مختلف BAP روی تعداد جوانه حاصل از کشت جوانه ریزوم آلسترومریا رقم Fuego            46

نمودار 4-2- مقایسه میانگین اثر سطوح مختلف NAA روی تعداد جوانه حاصل از کشت جوانه ریزوم آلسترومریا رقم Fuego           46

نمودار 4-3- مقایسه میانگین اثر سطوح مختلف BAP روی تعداد شاخساره حاصل از کشت جوانه ریزوم آلسترومریا رقم Fuego        48

نمودار 4-4- مقایسه میانگین اثر سطوح مختلف NAA روی تعداد شاخساره حاصل از کشت جوانه ریزوم آلسترومریا رقم Fuego       48

نمودار 4-5- مقایسه میانگین اثر سطوح مختلف BAP روی طول شاخساره حاصل از کشت جوانه ریزوم آلسترومریا رقم Fuego         50

نمودار 4-6- مقایسه میانگین اثر سطوح مختلف NAA روی طول شاخساره حاصل از کشت جوانه ریزوم آلسترومریا رقم Fuego        51

نمودار 4-7- مقایسه میانگین اثر سطوح مختلف BAP روی تعداد ریشه حاصل از کشت جوانه ریزوم آلسترومریا رقم Fuego 52

نمودار 4-8- مقایسه میانگین اثر سطوح مختلف NAA روی تعداد ریشه حاصل از کشت جوانه ریزوم آلسترومریا رقم Fuego            53

نمودار 4-9- مقایسه میانگین اثر سطوح مختلف BAP روی طول ریشه حاصل از کشت جوانه ریزوم آلسترومریا رقم Fuego  55

نمودار 4-10- مقایسه میانگین اثر سطوح مختلف NAA روی طول ریشه حاصل از کشت جوانه ریزوم آلسترومریا رقم Fuego           56

نمودار 4-11- مقایسه میانگین اثر سطوح مختلف BAP روی تعداد ریزوم حاصل از کشت جوانه ریزوم آلسترومریا رقم Fuego          57

نمودار 4-12- مقایسه میانگین اثر سطوح مختلف NAA روی تعداد ریزوم حاصل از کشت جوانه ریزوم آلسترومریا رقم Fuego         58

راهنمای خرید و دانلود فایل

برای پرداخت، از کلیه کارتهای عضو شتاب میتوانید استفاده نمائید.

بعد از پرداخت آنلاین لینک دانلود فعال و نمایش داده میشود ، همچنین یک نسخه از فایل همان لحظه به ایمیل شما ارسال میگردد.

در صورت بروز  هر مشکلی،میتوانید از طریق تماس با ما  پیغام بگذارید و یا در تلگرام با ما در تماس باشید، تا شکایت شما مورد بررسی قرار گیرد.

برای دانلود فابل روی دکمه خرید و دانلود  کلیک نمایید.