بررسی انتقال‌پذیری آغازگر‌های SSR گونه‌های خویشاوند در کهور پاکستانی : پایان نامه ارشد مهندسی کشاورزی زراعت و اصلاح نباتات

کشور عزیزمان ایران با توجه به تنوع اقلیم ، آب و هوای مطبوع و اراضی وسیعی که در اختیار دارد در صورت مدیریت در عرصه کشاورزی میتواند یکی از قطب های بلامنازع کشاورزی دنیا باشد و با پرورش دانش آموختگان خبره در گرایش های مختلف رشته کشاورزی میتوان به این مهم نایل آمد.دیجی لود در ادامه به معرفی پایان نامه های کارشناسی ارشد رشته کشاورزی میپردازد. پایان نامه حاضر با عنوان” بررسی انتقال‌پذیری آغازگر‌های SSR گونه‌های خویشاوند در کهور پاکستانی (Prosopis juliflora) ” با گرایش زراعت و اصلاح نباتات و با فرمت Word (قابل ویرایش) تقدیم شما دانشجویان عزیز میگردد.

چکیده بررسی انتقال‌پذیری آغازگر‌های SSR گونه‌های خویشاوند در کهور پاکستانی (Prosopis juliflora):

کهور پاکستانی یا سمر (Prosopis juliflora)گیاهی گرمسیری و به درجه حرارت‌های پایین حساس است که بخش زیادی از پوشش شنزار‌های استان خوزستان را به خود اختصاص داده ‌است. در سال 1390 به دلیل سرمازدگی تعداد زیادی از این گیاهان از بین رفتند و برخی بدون اینکه هیچ آسیبی دیده باشند باقی‌مانده بودند. برای شناسایی پایه‌های متحمل به سرما استفاده از نشانگر SSRدر نظر گرفته شد ولی به دلیل نبود آغازگرهای اختصاصی کهور پاکستانی، از 8 آغازگر SSR گونه‌های خویشاوند استفاده و انتقال‌پذیری آن‌ها بررسی شد.

در این رابطه از 9 درخت والدی باقی‌مانده از سرما و 38 فرزند گرفته شده از آن‌ها و 4 درخت شاهد دیگر که در شرایط بهتری از خسارت سرما مصون مانده بودند به عنوان شاهد (مجموعا 53 درخت) استفاده شد. استخراج DNAبه روش تغییریافته‌ی CTAB انجام شد و تکثیر قطعات به‌وسیله‌یPCR استاندارد و تفکیک و رنگ‌آمیزی قطعات تکثیرشده توسط ژل اکریل‌آمید هشت درصد و نیترات نقره صورت گرفت. تمامی آغازگرهای مورد استفاده تولید باند کردند. از 24 آلل تولید شده توسط 8 جایگاه مورد بررسی فقط 8 آلل (33 درصد) پلی‌مورفیسم نشان دادند.ردیابی این آلل‌های پلی‌مورف نشان داد که در این گیاه علاوه بر پروتوژنی نوعی خودناسازگاری همومورفیک نیز وجود دارد. در میان درختان والدی علی‌رغم زنده ماندن ازنظر زادآوری بیشتر فرزندان و به عبارت دیگر بیشتر گامت‌های زنده مانده از یخبندان به‌ترتیب اهمیت مربوط به دو درخت 103B و 106B بودند و بقیه‌ی 6 درخت والدی شایستگی چندانی نداشتند. لذا باید درخت 103B را دارای رتبه اول و با فاصله معنی‌داری درخت 106B را در مرتبه بعدی برای بذرگیری و تولید درختان مناسب برای مبارزه با بیابان‌زایی در مناطقی که احتمال یخبندان در آنها وجود دارد معرفی کرد، زیرا علاوه بر زنده‌مانی در یخبندان‌های موقتی مناطق شبیه خوزستان قادر به تولید فرزندان زایا هم هستند. آلل‌های 197 و 242 آغازگر Mo7، 269 آغازگرMo8، 261 آغازگر Mo9، 222 و 273 آغازگر Mo13، 158Mo16 و آلل295 آغازگر AK39 برای شناسایی درخت‌های متحمل به یخبندان در مناطقی شبیه به خوزستان مناسب شناسایی شدند.

مقدمه و اهداف بررسی انتقال‌پذیری آغازگر‌های SSR گونه‌های خویشاوند در کهور پاکستانی

خوزستان در تقسیم‌‌‌بندی کلی اقلیمی کشور در بخش صحرایی گرم و خشک طبقه‌بندی گردیده است، ولی هوای خوزستان در جلگه و سواحل خلیج فارس گرم و مرطوب، در نواحی کم ارتفاع صحرایی، گرم و خشک و در قسمت‌های کوهستانی با ارتفاع زیاد دارای آب و هوای مرطوب و سرد است.استان خوزستان تحت تاثیر سه نوع باد قرار دارد: اولین باد جریان سرد نواحی کوهستانی، دومین باد (شرجی) جریان گرم و رطوبتی از خلیج فارس است که به سوی جلگه می‌وزد و سومین باد، باد سموم است که از عربستان می‌وزد و همیشه مقداری شن و خاک و رطوبت به همراه دارد.از این روطرح‌های بیابان‌زدایی و مالچ‌پاشی از سال‌های گذشته در دست اجرا بوده‌است.

با این حال در سالهای اخیر خشک شدن تالاب هورالعظیم و وزش جریانات جوی از سوی عراق ریزگرد‌هایی که از سوی این دو کشور به ایران وارد می‌شوند به طور فزاینده‌ای افزایش داده که این امر موجب کاهش کیفیت هوا و همچنین کاهش کیفیت زندگی هموطنانمان به خصوص در استان‌های هم جوار با عراق شده‌است. از این رو تلاش برای افزایش پوشش گیاهی و جنگلی مناطق بیابانی و شنزار‌های مرزی، ضرورتی دوچندان یافته است.

از 000/200/1 هکتار وسعت بیابان‌ها و ماسه‌زار‌های استان خوزستان بالغ بر 000/350 هکتار آن را تپه‌های ماسه‌ای تشکیل می‌دهند (بی‌نام 1379). از جمله گیاهانی که در طرح‌های بیابان‌زدایی، تثبیت شن، توسعه‌ی فضای سبز و ایجاد پارک‌های جنگلی به‌کار گرفته شده‌است، کهور پاکستانی یا سمر با نام علمی Prosopis julifloraمی‌باشد که 141114 هزار هکتار از اراضی بیابانی به کشت آن اختصاص یافته است (صالحه شوشتری و همکاران، 1385). این گیاه با 2n=4x=56 کروموزوم (ترنچارد[1] و همکاران، 2008)، از خانواده‌ی Mimosaceae (مظفریان، 1378) گیاهی گرمسیری است که دارای رشد و تولید مثل چشم‌گیری می‌باشد. به همین دلیل در استان خوزستان به دلیل سازگاری بالا، از پراکنش زیادی برخوردار است. با این حال به درجه حرارت‌های پایین حساس می‌باشد.

طی سال‌های اخیر به دلیل تغییرات اقلیمی (اندرزیان، 1392)، فراوانی بروز یخبندان‌های شبانه و دما‌های زیر صفر خسارات ناشی از سرمازدگی و حتی انجماد افزایش یافته است. خسارت سرمازدگی در گونه‌های نواحی گرمسیر و نیمه‌گرمسیر اتفاق می‌افتد. به‌طوری که در سال 1390 به دلیل سرمای بیش از حد شبانه برای اراضی زیر کشت کهور پاکستانی بسیاری از پایه‌های این گیاه از بین رفتند. در این میان تعداد محدودی از پایه‌های درختی بدون اینکه آسیب ببینند باقی ماندند. چنین تصور می‌شد که این پایه‌ها مقاوم به سرما هستند. تحقیق حاضر با هدف بررسی تنوع این پایه‌ها طراحی و اجرا شد.

• آغازگرهای SSR گونه خویشاوند می توانند در سمر (کهور پاکستانی) باند تولید کنند.
• در توده‌های کهور پاکستانی موجود در خوزستان تنوع وجود دارد.

 اهداف بررسی انتقال‌پذیری آغازگر‌های SSR گونه‌های خویشاوند در کهور پاکستانی :

بدست آوردن آغازگرهایSSRجهت بررسی تنوع ژنتیکی در سمر (کهور پاکستانی).

بررسی تنوع نسبی توده‌های سمر (کهور پاکستانی) موجود در خوزستان

نتیجه‌گیری کلی

به دلیل وسعت زیاد بیابان ها و ماسه‌زارهای استان خوزستان طرح‌های بیابان‌زدایی، تثبیت شن، توسعه‌ی فضای سبز و ایجاد پارک‌های جنگلی از اهمیت ویژه‌ای برخوردار است. کهور پاکستانی Prosopis juliflora گیاهی تتراپلوئید و گرمسیری از خانواده‌ی Mimosaceae که به دلیل سازگاری بالا در استان خوزستان از پراکنش بالایی برخوردار است. طی تغییرات اقلیمی سال‌های اخیر و بروز یخبندان‌های شبانه در سال 1390 خسارات زیادی به سطح زیر پوشش این گیاه وارد شد. در این میان تعداد محدودی از پایه‌های درختی بدون اینکه آسیب ببینند باقی ماندند. چنین تصور می‌شد که این پایه‌ها متحمل به یخبندان‌های کوتاه مدت معمول در خوزستان هستند.

کلیه آغازگرها باند دادند و بر این اساس میزان انتقال‌پذیری آنها را باید 100درصد دانست ولی براساس تعداد آلل‌های پلی‌مورف، از 24 آلل تولید شده توسط 8 جایگاه مورد بررسی فقط 8 آلل پلی‌مورفیسم نشان داده‌اند که برابر با 33درصد می‌شود. بنابراین انتقال‌پذیری نشانگرهای انتخاب‌شده از گونه‌های خویشاوند پایین است.

بررسی‌ها نشان داد که در این عاوه بر خود ناسازگاری هترومورفیک (پروتوژنی) گیاه نوعی خودناسازگاری همومورفیک وجود دارد. بیشتر گامت‌های زنده مانده از یخبندان به‌ترتیب اهمیت مربوط به دو درخت 103Bو 106B بودند. لذا باید درخت 103B را دارای رتبه اول و با فاصله معنی‌داری درخت 106Bرا در مرتبه بعدی برای بذرگیری و تولید درختان مناسب برای مبارزه با بیابان‌زایی در مناطقی که احتمال یخبندان در آنها وجود دارد معرفی کرد، زیرا علاوه بر زنده‌مانی در یخبندان‌های موقتی مناطق شبیه خوزستان قادر به تولید فرزندان زایا هم هستند.در همین حال سایر درختان والدی علی‌رغم زنده ماندن ازنظر زادآوری شایستگی چندانی نداشته‌اند به‌طوری که متوسط شایستگی زادآوری احتمالی آنها 2/1درصد بود.

فهرست مطالب بررسی انتقال‌پذیری آغازگر‌های SSR گونه‌های خویشاوند در کهور پاکستانی

فصل اول : مقدمه 1

1-1 مقدمه و اهداف 3

2-1 فرضیه‌ها 5

3-1  اهداف 5

فصل دوم:‌ مروري بر پژوهش هاي انجام شده 7

1-2 تاریخچه 9

2-2 مشخصات گیاهشناسی 9

3-2 پراکندگی جغرافیایی 11

4-2 کاربرد‌ها 12

1-4-2 گل 12

2-4-2 غلاف 12

3-4-2 چوب 12

4-4-2 صمغ 13

5-4-2 خواص درمانی 13

5-2 اهمیت اقتصادی کاشت کهور در استان خوزستان 14

1-5-2 تولید بذر و لگوم(میوه 14

2-5-2 تثبیت شن‌های روان، بیابان‌زدایی و توسعه‌ی فضای سبز 15

6-2 روش‌های کشت و توسعه‌ی کهور پاکستانی 15

7-2 نشانگرها 16

1-7-2 ریزماهواره‌ها 16

2-7-2 ماهیت و مبدأ پلی مورفیسم 17

3-7-2 چگونگی ایجاد ریزماهواره‌ها 18

4-7-2 فراوانی ریزماهواره‌ها در ژنوم 18

5-7-2 برخی نقش‌های عملکردی ریزماهواره‌‌ها 19

6-7-2 کاربرد‌های ریزماهواره‌ها 19

8-2 مطالعات ژنتیکی انجام شده 19

فصل سوم: مواد و روش‎ها 27

1-3 سال و محل اجرای تحقیق 31

2-3 روش‌ها 31

1-2-3 تهیه‌ی نمونه‌ی گیاهی 31

2-2-3 استخراج DNA ژنومی 33

3-2-3 تعیین کیفیت و کمیت DNA استخراج شده 35

4-2-3 واکنش زنجیره‌ای پلی‌مراز 36

1-4-2-3 اجزای واکنش زنجیره‌ای پلی‌مراز 37

2-4-2-3 چرخه‌های حرارتی واکنش زنجیره‌ای پلی‌مراز 37

3-4-2-3 الکتروفورز ژل افقی محصول واکنش زنجیره‌ای پلی‌مراز 38

1-3-4-2-3 تهیه‌ی ژل آگارز یک درصد 38

2-3-4-2-3 مشاهده‌ی قطعات تکثیر شده 39

5-2-3 الکتروفورز ژل عمودی 39

1-5-2-3 تهیه ژل اکریل‌آمید 39

2-5-2-3 رنگ‌آمیزی ژل اکریل‌آمید 40

3-3 تجزیه و تحلیل داده‌های مولکولی 41

1-3-3 تجزیه خوشه‌ای 42

فصل چهارم : بحث و نتایج 43

1-4 استخراج DNA 45

2-4 کیفیت و کمیت DNA استخراج شده 45

1-2-4 نانودراپ 45

2-2-4 الکتروفورز ژل آگارز   46

3-4واکنش زنجیره‌ای پلی‌مراز 46

4-4 داده‌های حاصل از لوکوس‌های پلی‌مورف 49

5-4 نتایج آنالیز خوشه‌ای 54

فصل پنجم : نتیجه‌گیری کلی و پیشنهادها 57

1-5نتیجه‌گیری کلی ……….. 59

2-5پیشنهادها  60

منابع .61

فهرست منابع 63

فهرست جدول‌ها

جدول 1-3 مشخصات جغرافیایی والد‌ها .32

جدول 2-3 ترکیبات بافر استخراج CTAB .34

جدول 3-3 مشخصات آغازگرهایSSR .36

جدول 4-3 غلظت و مقدار اجزای واکنش PCR با آغازگرهای SSR .37

جدول 5-3 برنامه‌ی دمایی و زمانی واکنش زنجیره‌ای پلی‌مراز .38

جدول1-4 شرایط بهینه شده واکنش زنجیره‌ای پلی‌مراز برای هر آغازگر .47

جدول 2-4 دامنه‌های آللی مشاهده شده .47

جدول 3-4 نسبت‌های گامتی کروموزوم‌های باند‌دار در یک گیاه اتوتتراپلوئید .50

جدول 4-4فراوانی ژنوتیپی حاصل از تلاقی والد 103B  (AAOO) با سایر والدها 52

جدول 5-4فراوانی ژنوتیپی و فنوتیپی حاصل از تلاقی والد 103B (AAOO)با سایر والدها 52

جدول 6-4فراوانی ژنوتیپی حاصل از تلاقی والد103B(AOOO)با سایر والدها 52

جدول 7-4فراوانی ژنوتیپی و فنوتیپی حاصل از تلاقی والد103B (AOOO)با سایر والدها 53

فهرست اشکال

شکل1-2 Prosopis juliflora. شاخه و برگ و گل (X5/0)، میوه (X5/0)، غلاف ( X2)،گل (X5)، کاسه گل و تخمدان (X5)، (پاسیزنیک و همکاران، 2001 10

شکل 2-2 کشور‌هایی که P. julifloraدر آن‌ها وجود دارد 11

شکل 3-2 این شکل یک‌رشته‌ی DNA (یکی از دو رشته‌ی هومولوگ) حاوی لوکوس ریزماهواره (AT)_nرا نشان

می‌دهد 16

شکل1-3 عکس هوایی نمونه های والدی 32

شکل 1-4 تعیین غلظت DNA با استفاده از نانودراپ 45

شکل 2-4 نمونه‌ی DNA استخراج شده 46

شکل 3-4 چند شکلی حاصل از تکثیر با آغازگرMO9در برخی درختان فرزندی 48

شکل4-4درخت فیلوژنی برخی درختان مورد آزمایش 54

شکل5-4 دندروگرام به روشUPGMAبا استفاده از ماتریس فاصله جاکارد 56

راهنمای خرید و دانلود فایل

برای پرداخت، از کلیه کارتهای عضو شتاب میتوانید استفاده نمائید.

بعد از پرداخت آنلاین لینک دانلود فعال و نمایش داده میشود ، همچنین یک نسخه از فایل همان لحظه به ایمیل شما ارسال میگردد.

در صورت بروز  هر مشکلی،میتوانید از طریق تماس با ما  پیغام بگذارید و یا در تلگرام با ما در تماس باشید، تا شکایت شما مورد بررسی قرار گیرد.

برای دانلود فایل روی دکمه خرید و دانلود  کلیک نمایید.