بررسی ارتباط تشکیل بیوفیلم باکتری اشریشیا کلی یوروپاتوژن با ژن های pap و sfa کد کننده پیلی های P و S
سری جدیدی از پایان نامه های رشته زیست شناسی در گرایش های مختلف آن را برای دانلود کاربران و دانشجویان دانشکده های علوم پایه قرار میدهیم . پایان نامه حاضر با عنوان بررسی ارتباط تشکیل بیوفیلم باکتری اشریشیا کلی یوروپاتوژن با ژن های pap و sfa کد کننده پیلی های P و S با فرمت ورد (قابل ویرایش) معرفی میگردد.
چکیده تحقیق بررسی ارتباط تشکیل بیوفیلم باکتری اشریشیا کلی یوروپاتوژن با ژن های pap و sfa کد کننده پیلی های P و S
عفونت دستگاه ادراری یکی از شایعترین عفونت های بیمارستانی است که از کلونیزه شدن اشرشیا کلی یوروپاتوژن در اپیتلیوم مخاطی میزبان ناشی می شود و به بافت میزبان آسیب می رساند. ساختارهای مختلف سطح سلولی در تشکیل بیوفیلم در اشرشیاکلی یوروپاتوژن دخیل هستند. از جمله فاکتورهای سطحی در اتصال باکتری و تشکیل بیوفیلم، پیلی P و S می باشد. هدف از این مطالعه تعیین میزان مقاومت آنتی بیوتیکی ، بررسی تشکیل بیوفیلم اشریشیا کلی یوروپاتوژن، سنجش قدرت اتصالی یا خاصیت هیدروفوبیسیتی آن و بررسی وجود ژن های فیمبریه ای pap وsfa و ارتباط آنها در تشکیل بیوفیلم بود.
در این تحقیق تعداد 100 نمونه از کشت باکتری بیماران مشکوک به عفونت دستگاه ادراری (UTI) جمع آوری گردید. با استفاده از تست های بیوشیمیایی متداول E.coli بودن 70 نمونه تایید گردید. مقاومت آنتی بیوتیکی باکتری اشریشیا کلی یوروپاتوژن با استفاده از روش Kirby – Bauer مورد بررسی قرار گرفت. تشکیل بیوفیلم این باکتری با روش میکروتیترپلیت بررسی شد. به منظور بررسی اتصال باکتری و میزان هیدروفوبیسیتی ، روش هیدروکربن اکتان استفاده شد. پس از استخراج DNA با استفاده از کیت استخراج، حضور ژن های pap و sfa به روش Multiplex PCR مورد بررسی گرفت.
از مجموع 100 نمونه مورد بررسی به کمک روش های بیوشیمیایی متداول 70 نمونه به عنوان اشریشیا کلی یوروپاتوژن شناسایی شدند. نتایج نشان دادن که این باکتری با هیدروفوبیسیتی 23% توانایی تشکیل بیوفیلم را دارد. از نظرمیزان تشکیل بیوفیلم 86% قدرت بسیار کم، ٨/٢ ٪ قدرت متوسط و ٢/١١٪ دارای قدرت بسیار بالا نشان دادند. همچنین بر اساس نتایج بدست آمده از آزمایش Multiplex PCR بر روی 10 نمونه ای که بالاترین قدرت تشکیل بیوفیلم را داشتند، 10نمونه (100٪) واجد ژن pap، 7 نمونه (70٪) واجد ژن sfa و 7 نمونه (70٪) نیز به طور همزمان دارای ژن pap و sfa بودند.
نتایج این مطالعه نشان داد که ژن های pap و sfa شایعترین ژن های کد کننده پیلی در اشریشیا کلی های جدا شده از عفونت ادراری هستند که می توانند به اتصال این باکتری به بافت های میزبانی و تشکیل بیوفیلم های مقاوم به آنتی بیوتیک کمک کنند.
واژه های کلیدی: عفونتهای دستگاه ادراری، اشریشیا کلی یوروپاتوژن، تشکیل بیوفیلم ، Multiplex PCR
فهرست مطالب | ||
عنوان | صفحه | |
چکیده | 1 | |
فصل اول: کلیات تحقیق | ||
مقدمه | 2 | |
فصل دوم: مروری بر تحقیقات گذشته | ||
٢ـ١ـ اشریشیا کلی یوروپاتوژن (Uropathogenic E.coli; UPEC) | 4 | |
٢ـ٢ـ فاکتور های بیماری زای تولید شده توسط UPEC | 5 | |
٢ـ٢ـ١ـ ادهسین ها و فاکتور های موثر در کلونیزاسیون | 5 | |
١_٢_٢_١_ پیلی یا فیمبریه (Fimbriae) | 5 | |
٢_٢_٢_١_ فیمبریه نوع | 6 | |
٣_٢_٢_١_ فیمبریه P | 7 | |
٤_٢_٢_١_ فیمبریه S | 8 | |
٥_٢_٢_١_ تاژک و تحرک | 9 | |
٦_٢_٢_١_ Curli | 10 | |
٧_٢_٢_١_ پیلی F جنسی | 11 | |
٢ـ٢ـ٢ـ توکسین ها | 11 | |
١_٢_٢_٢_ آلفا همولیزین | 12 | |
٢_٢_٢_٢_ فاکتور نکروز دهنده سیتوتوکسیک (CNF_1) | 12 | |
٢ـ٢ـ٣ـ بقاء و فرار از سیستم ایمنی | 12 | |
١_٢_٢_٣_ سیدروفور ها (آئروباکتین) | 12 | |
٢_٢_٢_٣_ کپسول پلی ساکاریدی | 13 | |
٣_٢_٢_٣_ تشکیل بیوفیلم | 14 | |
٢ـ٣ـ عفونت های مجاری ادراری( Urinary Tract Infection; UTI) | 14 | |
٢ـ٣ـ١ـ نقش پیلی در عفونت های مجاری ادراری | 16 | |
٢ـ٤ـ بیوفیلم ها | 17 | |
٢ـ٤ـ١ـ توسعه بیوفیلم | 18 | |
٢ـ٤ـ٢ـ مقاومت آنتی بیوتیکی در بیوفیلم ها | 20 | |
٢ـ٤ـ٣ـ بررسی ارتباط بین تشکیل بیوفیلم، فاکتورهای یوروویرولان و مقاومت ضد میکروبی | 22 | |
٢ـ٥ـ نقش آب گریزی (Hydrophobicity) در اتصال باکتری اشریشیا کلی یوروپاتوژن | 23 | |
فصل سوم : مواد و روش ها | ||
٣ـ١ـ مواد و وسایل | 24 | |
٣ـ١ـ١ـ محیط های کشت استفاده شده | 24 | |
٣ـ١ـ٢ـ مواد شیمیایی | 24 | |
٣ـ١ـ٣ـ کیت ها | 24 | |
٣ـ١ـ٤ـ دستگاه ها | 24 | |
٣ـ٢ـ جمع آوری نمونه ها | 25 | |
٣ـ٣ـ جداسازی و خالص سازی | 25 | |
٣ـ٤ـ مشاهده میکروسکوپی | 25 | |
٣ـ٥ـ بررسی مقاومت آنتی بیوتیکی باکتریUPEC | 26 | |
٣ـ٦ـ بررسی تشکیل بیوفیلم UPEC با روش میکروتیتر پلیت | 26 | |
٣ـ٧ـ بررسی هیدروفوبیسیتی UPEC با استفاده از هیدروکربن اکتان | 26 | |
٣ـ٨ـ استخراج DNA با استفاده از کیت استخراج DNA شرکت سینا ژن | 28 | |
٣ـ٩ـ تعیین کیفیت DNA با استفاده از الکتروفورز بر روی ژل آگاروز | 28 | |
٣ـ١٠ـ PCR چند گانه (Multiplex PCR) | 29 | |
٣_١١_ الکتروفورز ژل آگارز | 31 | |
فصل چهارم: نتایج | ||
٤ـ١ـ آزمایشات تشخیصی برای تعیین اشریشیا کلی یوروپاتوژن (UPEC) | 33 | |
٤ـ٢ـ فراوانی باکتریهای بیماریزای جدا شده از ادرار | 34 | |
٤ـ٣ـ بررسی مقاومت آنتی بیوتیکی باکتری UPEC | 34 | |
٤ـ٤ـ بررسی تشکیل بیوفیلم UPEC با روش میکروتیتر پلیت | 36 | |
٤ـ٥ـ بررسی هیدروفوبیسیتی UPEC با استفاده از هیدروکربن اکتان | 38 | |
٤ـ٦ـ PCR چند گانه (Multiplex PCR) | 40 | |
فصل پنجم: بحث و نتیجه گیری | ||
٥ـ١ـ بررسی مقاومت آنتی بیوتیکی باکتری UPEC | 52 | |
٥ـ٢ـ بررسی تشکیل بیوفیلم UPEC با روش میکروتیتر پلیت | 44 | |
٥ـ٣ـ بررسی هیدروفوبیسیتی UPEC با استفاده از هیدروکربن اکتان | 45 | |
٥ـ٤ـ PCR چند گانه (Multiplex PCR) | 46 | |
نتیجه گیری | 48 | |
پیشنهادات | 49 | |
منابع و مآخذ | 50 | |
چکیده انگلیسی | 57 | |
فهرست شکل ها | |
عنوان | صفحه |
شکل ١_١_ تفاوت Pili و Curli | 11 |
شکل ١_٢_ کپسول پلی ساکاریدی | 13 |
شکل١_٣_ مراحل توسعه یافتگی بیوفیلم | 19 |
شکل٤_١_ کلنی ها با جلای فلزی UPEC | 34 |
شکل ٤_٢_ باسیل های گرم منفی UPEC | 34 |
شکل ٤_٣_ محیط های افتراقی جهت بررسی E.coli جدا شده از ادرار | 34 |
شکل ٤_٤_ هاله عدم رشد UPEC در حضور آنتی بیوتیک ها | 36 |
شکل ٤_٥_ تشکیل بیوفیلم UPEC با روش میکروتیتر پلیت با استفاده از روش اتصال به کریستال ویوله (CV) | 37 |
شکل ٤_٦_ بررسی هیدروفوبیسیتی(قدرت اتصال) UPEC با استفاده از هیدروکربن اکتان | 39 |
شکل ٤_٧_ نتایج الکتروفورز محصولPCR جهت شناساییژن هایpap (328 bp) و sfa (410 bp | 41 |
فهرست جدول ها | |
عنوان | صفحه |
جدول ١-١- ادهسین های اشریشیا کلی یوروپاتوژن (UPEC) | 9 |
جدول ٣-١- فرمول مورد نیاز برای تولید بیوفیلم | 27 |
جدول ٣-٢- پرایمرهای استفاده شده در Multiplex PCR برای تعیین ژنهای ویرولان pap و sfa | 30 |
جدول ٣-٣- دستور العمل انجام واکنش PCR تا حجم 25 میکرولیتر | 30 |
جدول ٣-4- مراحل برنامه تکثیر ژن های pap و sfa در دستگاه ترموسایکلر | 31 |
جدول ٤-١- نتایج تست های بیوشیمیایی جهت تایید باکتری های انتروباکتریاسه | 33 |
جدول ٤_٢_ نتایج حاصل از تست تعیین مقاومت آنتی بیوتیکی با روش کربی _ بوئر | 36 |
جدول ٤_٣_ نتایج تشکیل بیوفیلم | 38 |
جدول ٤_٤_ نتایج حضور ژن های pap و sfa به روش Multiplex PCR در اشریشیا کلی جدا شده از عفونت ادراری | 40 |
جدول ٤_٥_ نتایج حاصل از PCR برای 10 نمونه تشکیل دهنده بیوفیلم | 40 |
فهرست نمودارها | |
عنوان | صفحه |
نمودار ٤_١_ درصد عوامل باکتریایی ایجاد کننده عفونت ادراری | 35 |
نمودار٤_٢_ درصد مقاومت E.coli جدا شده از مبتلایان عفونت ادراری به آنتی بیوتیک ها | 35 |
نمودار ٤_٣_ درصد تشکیل بیوفیلم UPEC | 38 |
نمودار ٤_٤_ درصد هیدروفوبیسیتی UPEC به هیدروکربن اکتان | 39 |
راهنمای خرید و دانلود فایل
برای پرداخت، از کلیه کارتهای عضو شتاب میتوانید استفاده نمائید.
بعد از پرداخت آنلاین لینک دانلود فعال و نمایش داده میشود ، همچنین یک نسخه از فایل همان لحظه به ایمیل شما ارسال میگردد.
در صورت بروز هر مشکلی،میتوانید از طریق تماس با ما پیغام بگذارید و یا در تلگرام با ما در تماس باشید، تا مشکل مورد بررسی قرار گیرد. دیجی لود متعهد میشود که هر طور شده فایل خریداری شده ، به دست شما خواهد رسید.
برای دانلود فابل روی دکمه خرید و دانلود کلیک نمایید.
ديدگاه ها