پایان نامه ، تحقیق و مقاله | دیجی لود

ادامه مطلب

DOC
بررسی ارتباط تشکیل بیوفیلم باکتری اشریشیا کلی یوروپاتوژن با ژن های pap و sfa کد کننده پیلی های P و S
doc
تعداد صفحات : 75
پایان نامه کارشناسی ارشد
زیست شناسی
79000 تومان


سری جدیدی از پایان نامه های رشته زیست شناسی  در گرایش های مختلف آن را برای دانلود کاربران و دانشجویان دانشکده های علوم پایه قرار میدهیم . پایان نامه حاضر با عنوان بررسی ارتباط تشکیل بیوفیلم باکتری اشریشیا کلی یوروپاتوژن با ژن های pap و sfa کد کننده پیلی های P و S   با فرمت ورد (قابل ویرایش) معرفی میگردد.

چکیده تحقیق بررسی ارتباط تشکیل بیوفیلم باکتری اشریشیا کلی یوروپاتوژن با ژن های pap و sfa کد کننده پیلی های P و S

عفونت دستگاه ادراری یکی از شایعترین عفونت های بیمارستانی است که از کلونیزه شدن اشرشیا کلی یوروپاتوژن در اپیتلیوم مخاطی میزبان ناشی می شود و به بافت میزبان آسیب می رساند. ساختارهای مختلف سطح سلولی در تشکیل بیوفیلم در اشرشیاکلی یوروپاتوژن دخیل هستند. از جمله فاکتورهای سطحی در اتصال باکتری و تشکیل بیوفیلم، پیلی P و S می باشد. هدف از این مطالعه تعیین میزان مقاومت آنتی بیوتیکی ، بررسی تشکیل بیوفیلم اشریشیا کلی یوروپاتوژن، سنجش قدرت اتصالی یا خاصیت هیدروفوبیسیتی آن و بررسی وجود ژن های فیمبریه ای pap  وsfa و ارتباط آنها در تشکیل بیوفیلم بود.

در این تحقیق تعداد 100 نمونه از کشت باکتری بیماران مشکوک به عفونت دستگاه ادراری (UTI) جمع آوری گردید. با استفاده از تست های بیوشیمیایی متداول E.coli بودن 70 نمونه تایید گردید. مقاومت آنتی بیوتیکی باکتری اشریشیا کلی یوروپاتوژن با استفاده از روش Kirby – Bauer مورد بررسی قرار گرفت. تشکیل بیوفیلم این باکتری با روش میکروتیترپلیت بررسی شد. به منظور بررسی اتصال باکتری  و میزان هیدروفوبیسیتی ، روش هیدروکربن اکتان استفاده شد. پس از استخراج DNA با استفاده از کیت استخراج، حضور ژن های pap و sfa  به روش Multiplex PCR مورد بررسی گرفت.

از مجموع 100 نمونه مورد بررسی به کمک روش های بیوشیمیایی متداول 70 نمونه به عنوان اشریشیا کلی یوروپاتوژن شناسایی شدند. نتایج نشان دادن  که این باکتری با هیدروفوبیسیتی 23%  توانایی تشکیل بیوفیلم را دارد. از نظرمیزان تشکیل بیوفیلم 86% قدرت بسیار کم، ٨/٢ ٪ قدرت متوسط و ٢/١١٪ دارای قدرت بسیار بالا نشان دادند. همچنین بر اساس نتایج بدست آمده از آزمایش Multiplex PCR بر روی 10 نمونه ای که بالاترین قدرت تشکیل بیوفیلم را داشتند، 10نمونه (100٪) واجد ژن pap، 7 نمونه (70٪) واجد ژن sfa و 7 نمونه (70٪) نیز به طور همزمان دارای ژن pap و sfa بودند.

نتایج این مطالعه نشان داد که ژن های  pap و sfa شایعترین ژن های کد کننده پیلی در اشریشیا کلی های جدا شده از عفونت ادراری هستند که می توانند به اتصال این باکتری به بافت های میزبانی و تشکیل بیوفیلم های مقاوم به آنتی بیوتیک کمک کنند.

واژه های کلیدی: عفونت­های دستگاه ادراری، اشریشیا کلی یوروپاتوژن، تشکیل بیوفیلم ، Multiplex PCR

 

 

فهرست مطالب

عنوانصفحه
چکیده1
فصل اول: کلیات تحقیق
مقدمه2
فصل دوم: مروری بر تحقیقات گذشته
٢ـ١ـ اشریشیا کلی یوروپاتوژن  (Uropathogenic E.coli; UPEC)4
٢ـ٢ـ  فاکتور های بیماری زای تولید شده توسط UPEC5
٢ـ٢ـ١ـ  ادهسین ها و فاکتور های موثر در کلونیزاسیون5
١_٢_٢_١_  پیلی یا فیمبریه (Fimbriae)5
٢_٢_٢_١_ فیمبریه نوع6
٣_٢_٢_١_ فیمبریه P7
٤_٢_٢_١_ فیمبریه S8
٥_٢_٢_١_  تاژک و تحرک9
٦_٢_٢_١_  Curli10
٧_٢_٢_١_   پیلی F جنسی11
٢ـ٢ـ٢ـ توکسین ها11
١_٢_٢_٢_ آلفا همولیزین12
٢_٢_٢_٢_ فاکتور نکروز دهنده سیتوتوکسیک (CNF_1)12
٢ـ٢ـ٣ـ  بقاء و فرار از سیستم ایمنی12
١_٢_٢_٣_ سیدروفور ها  (آئروباکتین)12
٢_٢_٢_٣_  کپسول پلی ساکاریدی13
٣_٢_٢_٣_ تشکیل  بیوفیلم14
٢ـ٣ـ  عفونت های مجاری ادراری( Urinary Tract Infection; UTI)14
٢ـ٣ـ١ـ نقش پیلی در عفونت های مجاری ادراری16
٢ـ٤ـ بیوفیلم ها17
٢ـ٤ـ١ـ توسعه بیوفیلم18
٢ـ٤ـ٢ـ مقاومت آنتی بیوتیکی در بیوفیلم ها20
٢ـ٤ـ٣ـ بررسی ارتباط بین تشکیل بیوفیلم، فاکتورهای یوروویرولان و مقاومت ضد میکروبی22
٢ـ٥ـ نقش آب گریزی (Hydrophobicity) در اتصال باکتری اشریشیا کلی یوروپاتوژن23
فصل سوم : مواد و روش ها
٣ـ١ـ  مواد و وسایل24
٣ـ١ـ١ـ محیط های کشت استفاده شده24
٣ـ١ـ٢ـ مواد شیمیایی24
٣ـ١ـ٣ـ کیت ها24
٣ـ١ـ٤ـ دستگاه ها24
٣ـ٢ـ  جمع آوری نمونه ها25
٣ـ٣ـ جداسازی و خالص سازی25
٣ـ٤ـ مشاهده میکروسکوپی25
٣ـ٥ـ بررسی مقاومت آنتی بیوتیکی باکتریUPEC26
٣ـ٦ـ بررسی تشکیل بیوفیلم UPEC با روش میکروتیتر پلیت26
٣ـ٧ـ بررسی هیدروفوبیسیتی UPEC با استفاده از هیدروکربن اکتان26
٣ـ٨ـ استخراج DNA با استفاده از کیت استخراج DNA شرکت سینا ژن28
٣ـ٩ـ تعیین کیفیت DNA با استفاده از الکتروفورز بر روی ژل آگاروز28
٣ـ١٠ـ PCR  چند گانه (Multiplex PCR)29
٣_١١_ الکتروفورز ژل آگارز31
فصل چهارم: نتایج
٤ـ١ـ آزمایشات تشخیصی برای تعیین اشریشیا کلی یوروپاتوژن  (UPEC)33
٤ـ٢ـ فراوانی باکتریهای بیماریزای جدا شده از ادرار34
٤ـ٣ـ بررسی مقاومت آنتی بیوتیکی باکتری UPEC34
٤ـ٤ـ بررسی تشکیل بیوفیلم UPEC با روش میکروتیتر پلیت36
٤ـ٥ـ بررسی هیدروفوبیسیتی UPEC با استفاده از هیدروکربن اکتان38
٤ـ٦ـ PCR  چند گانه (Multiplex PCR)40
 

فصل پنجم: بحث و نتیجه گیری

٥ـ١ـ بررسی مقاومت آنتی بیوتیکی باکتری UPEC52
٥ـ٢ـ بررسی تشکیل بیوفیلم UPEC با روش میکروتیتر پلیت44
٥ـ٣ـ بررسی هیدروفوبیسیتی UPEC با استفاده از هیدروکربن اکتان45
٥ـ٤ـ PCR  چند گانه (Multiplex PCR)46
نتیجه گیری48
پیشنهادات49
منابع و مآخذ50
چکیده انگلیسی57

 

 

فهرست شکل ها
عنوانصفحه
شکل ١_١_ تفاوت Pili و Curli  11
شکل ١_٢_ کپسول پلی ساکاریدی13
شکل١_٣_ مراحل توسعه یافتگی بیوفیلم19
شکل٤_١_  کلنی ها با جلای فلزی UPEC34
شکل ٤_٢_ باسیل های گرم منفی UPEC34
شکل ٤_٣_ محیط های افتراقی جهت بررسی E.coli جدا شده از ادرار34
شکل ٤_٤_ هاله عدم رشد UPEC در حضور آنتی بیوتیک ها36
شکل ٤_٥_ تشکیل بیوفیلم UPEC با روش میکروتیتر پلیت با استفاده از روش اتصال به کریستال ویوله (CV)37
شکل ٤_٦_ بررسی هیدروفوبیسیتی(قدرت اتصال) UPEC با استفاده از هیدروکربن اکتان39
شکل ٤_٧_ نتایج الکتروفورز محصولPCR جهت شناسایی­ژن هایpap (328 bp)  و  sfa (410 bp41

 

 

فهرست جدول ها
عنوان صفحه
جدول ١-١-  ادهسین های اشریشیا کلی یوروپاتوژن (UPEC)9
جدول ٣-١- فرمول  مورد نیاز برای  تولید بیوفیلم27
جدول ٣-٢-  پرایمرهای استفاده شده در Multiplex PCR برای تعیین ژنهای ویرولان pap  و sfa30
جدول ٣-٣- دستور العمل انجام واکنش PCR تا حجم 25 میکرولیتر30
جدول ٣-4- مراحل برنامه تکثیر ژن های pap  و sfa در دستگاه ترموسایکلر31
جدول ٤-١-  نتایج تست های بیوشیمیایی جهت تایید باکتری های انتروباکتریاسه33
جدول ٤_٢_ نتایج حاصل از تست تعیین مقاومت آنتی بیوتیکی با روش کربی _ بوئر36
جدول ٤_٣_ نتایج تشکیل بیوفیلم38
جدول ٤_٤_ نتایج حضور ژن های pap و sfa به روش Multiplex PCR در اشریشیا کلی جدا شده از عفونت ادراری40
جدول ٤_٥_ نتایج حاصل از PCR برای 10 نمونه تشکیل دهنده بیوفیلم40

 

 

فهرست نمودارها
عنوان صفحه
نمودار ٤_١_ درصد عوامل باکتریایی ایجاد کننده عفونت ادراری35
نمودار٤_٢_ درصد مقاومت E.coli  جدا شده از مبتلایان عفونت ادراری به آنتی بیوتیک ها35
نمودار ٤_٣_ درصد تشکیل بیوفیلم  UPEC  38
نمودار ٤_٤_ درصد هیدروفوبیسیتی UPEC به هیدروکربن اکتان39

 

 

 

راهنمای خرید و دانلود فایل

برای پرداخت، از کلیه کارتهای عضو شتاب میتوانید استفاده نمائید.

بعد از پرداخت آنلاین لینک دانلود فعال و نمایش داده میشود ، همچنین یک نسخه از فایل همان لحظه به ایمیل شما ارسال میگردد.

در صورت بروز  هر مشکلی،میتوانید از طریق تماس با ما  پیغام بگذارید و یا در تلگرام با ما در تماس باشید، تا مشکل مورد بررسی قرار گیرد. دیجی لود متعهد میشود که هر طور شده فایل خریداری شده ، به دست شما خواهد رسید.

برای دانلود فابل روی دکمه خرید و دانلود  کلیک نمایید.



ads

ديدگاه ها


دیدگاهتان را بنویسید

نشانی ایمیل شما منتشر نخواهد شد. بخش‌های موردنیاز علامت‌گذاری شده‌اند *

یک × دو =