DOC
doc
تعداد صفحات : 97
پایان نامه کارشناسی ارشد
رشته کشاورزی - گرایش بیماری شناسی گیاهی
79000 تومان
بررسي خصوصيات بيولوژيکي و مولکولي جدايه هاي ايراني ويروس بي بذري گوجه فرنگي (TAV) از گياهان زينتي : پایان نامه ارشد کشاورزی
کشور عزیزمان ایران با توجه به تنوع اقلیم ، آب و هوای مطبوع و اراضی وسیعی که در اختیار دارد در صورت مدیریت در عرصه کشاورزی میتواند یکی از قطب های بلامنازع کشاورزی دنیا باشد و با پرورش دانش آموختگان خبره در گرایش های مختلف رشته کشاورزی میتوان به این مهم نایل آمد.دیجی لود در ادامه به معرفی پایان نامه های کارشناسی ارشد رشته کشاورزی میپردازد. پایان نامه حاضر با عنوان” بررسي خصوصيات بيولوژيکي و مولکولي جدايه هاي ايراني ويروس بي بذري گوجه فرنگي (TAV) از گياهان زينتي ” با گرایش بیماری شناسی گیاهی و با فرمت Word (قابل ویرایش) تقدیم شما دانشجویان عزیز میگردد.
چکیده بررسي خصوصيات بيولوژيکي و مولکولي جدايه هاي ايراني ويروس بي بذري گوجه فرنگي (TAV) از گياهان زينتي:
ويروس بيبذري گوجه فرنگيTAV)) از خانواده بروموويريده و جنس کوکوموويروس بوده که از اکثر نقاط دنيا گزارش گرديده و در ميزبانهاي متعددي ايجاد بيماري ميکند. ژنوم ويروس متشکل از سه قطعه آر.ان.اي تک رشتهاي مثبت مي باشد که پروتئينهاي متفاوتي را کد مينمايد.
در اين تحقيق به منظور شناسايي و معرفي ويروس TAV ازايران، طي سالهاي 88 الي90 تعداد 413 نمونه گياهي از استانهاي کرمان، همدان، آذربايجان غربي، آذربايجان شرقي، فارس و يزد جمع آوري و جهت تأئيد آلودگي نمونه ها از آزمون DAS-ELISA استفاده گرديد. نتايج حاصل از اين آزمون بيانگر شناسايي و وجود ويروس بيبذري گوجه فرنگي از روي گياهان اطلسي و داوودي در کشور بود. با توجه به اينكه ويروس TAV براي نخستين بار در ايران شناسايي ميگردد، لذا جدايه اطلسي (Ker.Mah.P) ويروس رديابي شده از منطقه ماهان استان کرمان به منظور مطالعات مولكولي و تكثير طول کامل ژنوم و جدايه داوودي (Ker.Ker.Ch.1) نيز جهت تكثير ژن پروتئين پوششي و به دنبال آن تعيين جايگاه تکاملي آنها و مطالعات بيولوژيکي مورد بررسي قرار گرفتند.
جهت تعيين دامنه ميزباني جدايه هاي ايراني TAV از 34 گونه گياهي از7 خانواده استفاده گرديد که نتايج حاصل بيانگر دامنه ميزباني گسترده جدايه هاي ايراني TAV مي باشد. طول کامل ژنوم جدايه ايراني Ker.Mah.P و ژن CP جدايه Ker.Ker.Ch.1 نيز با استفاده از آغازگرهاي اختصاصي با روش RT-PCR تکثير و سپس همسانه سازي و تعيين ترادف گرديدند. براساس نتايج بدست آمده طول قطعات RNA-1، RNA-2 و RNA-3 جدايه ايراني Ker.Mah.P به ترتيب 3351، 3008 و 2192 نوکلئوتيد تعيين گرديد و در نهايت طول کامل ژنوم اين جدايه معادل 8551 نوکلئوتيد مي باشد. همچنين نتايج حاصل از تجزيه فيلوژنتيکي براساس ناحيه ژني CP بيانگر آن است که جدايه هاي TAV در دو گروه اصلي I و II قرار مي گيرند. گروه I نيز به دو زير گروه IIA و IIB تقسيم ميگردد که هر دو جدايه ايراني TAV در زير گروه IIA به همراه جدايههاي گزارش شده از کشورهاي مختلف دنيا واقع ميگردند. همچنين جدايه هاي ايراني داراي ميزان مشابهت بالاي ترادف نوکلئوتيدي و اسيدهاي آمينه مربوط به ژن پروتئين پوششي به ميزان بيش از 99 درصد با يکديگر ميباشند.
نتايج حاصل از اين تحقيق بيانگر آن است که ترادف نوکلئوتيدي جدايه هاي ايراني TAV، علي رغم وجود اين جدايه ها در يک منطقه جغرافيايي جديد و ميزبان متفاوت (گياه اطلسي)، شبيه ديگر جدايه هاي گزارش شده اين ويروس به شدت حفاظت شده ميباشند. همچنين گياه اطلسي براي نخستين بار در دنيا به عنوان ميزبان طبيعي ويروس TAV شناسايي و گزارش مي گردد.
معرفي ويروس بي بذزي گوجه فرنگي
ويروس بي بذري گوجه فرنگي[1] ويروسي است از خانواده بروموويريده[2] و جنس کوکوموويروس[3] که براي نخستين بار در سال 1939 توسط Ainsworth از روي گياه داوودي و در سال 1949 از روي گياه گوجه فرنگي توسط Blencowe و Caldwell گزارش گرديد. ويروس بي بذري گوجه فرنگي گسترش جهاني داشته و در کشتهاي داوودي ايجاد آلودگي نموده در حاليکه در کشت هاي گوجه فرنگي کمتر يافت مي گردد (Hollings & Stone, 1970). پيکرههاي TAV ايزومتريک به قطر حدودا 30 نانومتر و ژنوم ويروس متشکل از سه قطعه آر.ان.اي تک رشته اي[4] مثبت و چهار قطعه آر.ان.اي زير ژنومي[5] مي باشد (Shi et al., 1997). هر يک از قطعات کد کننده پروتئين هاي متفاوتياند. RNA-1 داراي يک ORF[6] بوده که پروتئين 1a راکد مي نمايد. RNA-2 و RNA-3 هر کدام داراي دو ORF بوده و به ترتيب پروتئين هاي 2a، 2b، 3a و 3b را کد مينمايند. اين ويروس به راحتي توسط تعداد زيادي از گونه هاي شته خانواده آفيديده[7] از جمله شته سبز هلو[8] به شيوه ناپايا منتقل ميگردد. همچنين اين ويروس از طريق مايه زني، پيوند و بذر هم قابل انتقال ميباشد (Raj et al.,2011; Hollings & Stone, 1970).
اهداف تحقيق
در اين تحقيق ويروس بي بذري گوجه فرنگي براي نخستين بار از ايران و از گياهان اطلسي و داوودي معرفي ميگردد. با توجه به دامنه ميزباني گسترده اين ويروس و جديد بودن آن در کشور، لذا هدف از اين تحقيق شامل موارد زير ميباشد:
1- شناسايي ويروس بي بذري گوجه فرنگي از طريق آزمونهاي سرولوژيکي (الايزا[9]) و مولکولي (پي.سي.آر[10])
2- همسانهسازي و تعيين ترادف طول کامل جدايه ايراني TAV بدست آمده از گياه اطلسي
3- همسانهسازي و تعيين ترادف ژن پروتئين پوششی[11] جدايه ايراني TAV بدست آمده از گياه داوودي
4-تعيين جايگاه تکاملي جدايههاي ايراني ويروس بي بذري گوجه فرنگي در مقايسه با ساير جدايه هاي موجود در بانک ژن
5- مقايسه ترادف نوکلئوتيدي و اسيدهايآمينه جدايه هاي ايراني TAV با ساير جدايه هاي اين ويروس موجود در بانک ژن
6- تعيين دامنه ميزباني جدايههاي ايراني ويروس بي بذري گوجه فرنگي
فهرست مطالب | |
| فصل اول: مقدمه | |
| 1 | 1-1- معرفي ويروس بي بذزي گوجه فرنگي |
| 1 | 1-2- بررسي دامنه ميزبانهاي طبيعي و علائم ويروس بي بذري گوجه فرنگي |
| 2 | 1-2-1- ميز بانهاي اوليه |
| 2 | 1-2-1-1-گل داوودي |
| 2 | 1-2-1-1-1- علائم ويروس بي بذزي گوجه فرنگي بر روي گياه داوودي |
| 3 | 1-2-1-1-2- ديگر ويروس هاي داوودي |
| 3 | 1-2-1-2- گياه گوجه فرنگي |
| 3 | 1-2-1-2-1- علائم ويروس بي بذري گوجه فرنگي بر روي گياه گوجه فرنگي |
| 4 | 1-2-1-2-2- ديگر ويروس هاي گوجه فرنگي |
| 4 | 1-2-2- ميزبان هاي ثانويه ويروس بيبذري گوجه فرنگي |
| 4 | 1-2-2-1- خانواده Compositae |
| 4 | 1-2-2-1-1-گل آهار |
| 4 | 1-2-2-2- خانواده Solanaceae |
| 4 | 1-2-2-2-1-گياه فلفل |
| 5 | 1-2-2-3- خانواده Iridaceae |
| 5 | 1-2-2-3-1- گل گلايول |
| 5 | -2-2-3-2- گل سنبل |
| 6 | 1-2-2-4- خانواده Tropaeolaceae |
| 6 | 1-2-2-4-1- گل لادن |
| 6 | 1-2-2-5- خانواده Cannaceae |
| 6 | 1-2-2-5-1- گل اختر |
| 7 | 1-2-2-6- خانواده Liliaceae |
| 7 | 1-2-2-6-1- گل سوسن |
| 7 | 1-2-2-7- خانواده Lamiaceae |
| 7 | 1-2-2-7-1- گياه نعناع |
| 7 | 1-2-2-8- خانواده Leguminosae |
| 7 | 1-2-2-8-1- گياه لوبيا |
| 8 | 1-2-2-9- خانواده Chenopodiaceae |
| 8 | 1-2-2-9-1- گياه اسفناج |
| 8 | 1-2-2-10- خانواده Campanulaceae |
| 8 | 1-2-2-3-10- گل استکاني |
| 9 | 1-3- اهداف تحقيق |
| فصل دوم: مروري برمنابع | |
| 10 | 2-1- جايگاه ويروس بي بذري گوجه فرنگي در طبقه بندي ويروسهاي گياهي |
| 10 | 2-2- جنس کوکوموويروس |
| 10 | 2-2-1- ويژگي هاي ويريون |
| 11 | 2-2-2- ويژگي هاي ژنو |
| 12 | 2-2-3- عملکرد پروتئين ها در جنس کوکوموويروس |
| 12 | 2-2-3-1- پروتئين 1a |
| 12 | 2-2-3-2- پروتئين 2a |
| 13 | 2-2-3-3- پروتئين 2b |
| 14 | 2-2-3-4- پروتئين 3a |
| 14 | 2-2-3-5- پروتئين پوششي (CP) |
| 15 | 2-3- ويروس بيبذري گوجه فرنگي در جهان |
| 16 | 2-3-1- سازماندهي ژنوم ويروس بيبذري گوجه فرنگي |
| 16 | 2-3-2- آر.ان.ايهاي ژنومي |
| 16 | 2-3-2-1- قطعه RNA-1 |
| 17 | 2-3-2-2- قطعه RNA-2 |
| 18 | 2-3-2-3- قطعه RNA-3 |
| 18 | 2-3-3- آر.ان.ايهاي زيرژنومي |
| 19 | 2-4- دامنه ميزباني و علائم ويروس بيبذري گوجه فرنگي |
| 19 | 2-4-1- دامنه ميزباني ويروس بيبذري گوجه فرنگي بر روي گياهان آزمون |
| 19 | 2-4-2- گياهان تشخيصي ويروس ويروس بيبذري گوجه فرنگي |
| 20 | 2-4-3-گياهان تکثيري ويروس بيبذري گوجه فرنگي |
| 20 | 2-5- تفاوتهاي ويروس بيبذري گوجه فرنگي و ويروس موزائيک خيار |
| 21 | 2-6 – روشهاي انتقال ويروس بيبذري گوجه فرنگي |
| 21 | 2-6-1- انتقال با حشره ناقل |
| 21 | 2-6-2- انتقال با بذر |
| 21 | 2-6-3- انتقال با سس |
| 21 | 2-7- سرولوژي |
| 22 | 2-8- ويژگي هاي فيزيکي و فيزيوشيميايي |
| 22 | 2-9- مکانيزم ايجاد بي بذري توسط ويروس بيبذري گوجه فرنگي |
| 23 | 2-10- زيان هاي اقتصادي توسط ويروس بيبذري گوجه فرنگي |
| 23 | 2-11- نقش پروتئين حرکتي ويروس بيبذري گوجه فرنگي در بروز علائم |
| 24 | 2-12- نقش پروتئين پوششي ويروس بيبذري گوجه فرنگي در ايجاد آلودگي سيستميک در گياه |
| 25 | 2-13- هيستولوژي |
| فصل سوم: مواد و روشها | |
| 26 | 3-1- نمونه برداري |
| 26 | 3-2- آزمون الايزا |
| 26 | 3-2-1- مراحل الايزاي ساندويچ دو طرفه |
| 27 | 3-2-2- بافرهاي مورد استفاده در آزمون هاي الايزا |
| 29 | 3-3- تعيين دامنه ميزباني ويروس بيبذري گوجه فرنگي و مطالعات گلخانه اي |
| 29 | 3-3-1- بافر فسفات 1/0 مولار 7 pH= |
| 30 | 3-4- مطالعات مولکولي |
| 30 | 3-4 -1- استخراج Total RNA با استفاده از کيت High pure viral nucleic acid kit |
| 31 | 3-4-2- آزمون واکنش زنجيره اي پليمراز به روش نسخه برداري معکوس |
| 31 | 3-4-2-1- مرحله سنتز cDNA |
| 32 | 3-4-2-2- مراحل آزمون PCR |
| 32 | 3-4-3- آغازگرهاي اختصاصي مورد استفاده جهت تکثير ژنوم جدايه ايراني ويروس بيبذري گوجه فرنگي |
| 32 | 3-4-4- الکتروفورزافقي |
| 33 | 3-4-4-1- مواد لازم جهت تهيه بافر TBE |
| 33 | 3-4-4-2- آماده سازي نشانگر مولکولي |
| 33 | 3-5- همسانه سازي و تعيين توالي قطعات مختلف ژنوم جدايه ايراني ويروس بيبذري گوجه فرنگي مجزا شده از گياه اطلسي (Ker.Mah.P) و ژن پروتئين پوششي جدايه مجزا شده از گياه داوودي (Ker.Ker.Ch.1) |
| 34 | 3-5-1- قراردادن قطعه DNA موردنظر درون ناقل (Ligation) |
| 34 | 3-5-1-1- خالص سازي محصول پي.سي.آر با استفاده از کيت (High Pure PCR Product Purification Kit) |
| 34 | 3-5-1-2- استخراج از ژل با استفاده از کيت Agarose Gel DNA Extraction Kit |
| 35 | 3-5-2- مراحل آماده سازي باکتري جهت عمل ترنسفورماسيون (Transformation) |
| 35 | 3-5-2-1- کشت باکتري Escherichia coli بر روي محيط کشت جامد (Luria Bertani) LB |
| 36 | 3-5-2-2-کشت باکتري E.coli در محيط مايع C-medium |
| 36 | 3-5-2-3- تهيه سلول هاي مستعد (competent cell) باکتري E.coli |
| 37 | 3-5-3- انتقال پلاسميد نوترکيب به درون باکتري E.coli (Transformation) |
| 37 | 3-5-4- محيط کشت جامد حاوي آمپي سيلين، IPTG و X-gal |
| 38 | 3-5-5- انتخاب پرگنه جهت استخراج پلاسميد نوترکيب |
| 38 | 3-5-6- استخراج پلاسميد نوترکيب از باکتري توسط روش Boiling: |
| 39 | 3-5-7- استخراج پلاسميد نوترکيب از باکتري توسط High Pure Plasmid Isolation Kit, |
| 40 | 3-5-7-1- مواد تشکيل دهنده بافرهاي استفاده شده در استخراج پلاسميد |
| 40 | 3-5-8- هضم آنزيمي پلاسميد (Digestion) |
| 41 | 3-5-9- انجام الکتروفورز جهت بررسي صحت انجام عمل هضم آنزيمي پلاسميد و همسانه سازي |
| 41 | 3-6- نگهداري باکتري حاوي پلاسميد نوترکيب |
| 41 | 3-7- آماده سازي نمونه ها به منظورتعيين توالي نوکلئوتيدي |
| 41 | 3-8- تعيين ترادف ژنوم کامل جدايه ايراني ويروس بيبذري گوجه فرنگي مجزا شده از گياه اطلسي (Ker.Mah.P) و ژن پروتئين پوششي جدايه مجزا شده از گياه داوودي (Ker.Ker.Ch.1) و مقايسه آنها با ساير جدايه هاي موجود در بانک ژن |
| فصل چهارم: نتايج | |
| 43 | 4-1- شناسايي و معرفي ويروس بي بذري گوجه فرنگي در ايران |
| 43 | 4-1-1- علائم جدايه هاي شناسايي شده |
| 43 | 4-1-1-1- جدايه اطلسي (Ker.Mah.P) |
| 43 | 4-1-1-2- جدايه داوودي (Ker.Ker.Ch.1) |
| 44 | 4-2- تعيين دامنه ميزباني جدايههاي ايراني ويروس بيبذري گوجه فرنگي |
| 44 | 4-2-1- بررسي علايم ايجاد شده بر روي گياهان مايه زني شده خانواده Solanaceae |
| 44 | 4-2-1-1- علائم ايجاد شده بر روي ميزبان هاي طبيعي ويروس بيبذري گوجه فرنگي |
| 44 | 4-2-1-1-1-گياه گوجه فرنگي |
| 44 | 4-2-1-1-2- گياه فلفل |
| 45 | 4-2-1-1-3- گل اطلسي |
| 45 | 4-2-1-2- علائم بر روي ميزبان¬هاي آزمايشگاهي ويروس در خانواده Solanaceae |
| 45 | 4-2-1-2-1- گياه توتون Nicotiana glutinosa L. |
| 45 | 4-2-1-2-2- گياه توتون Nicotiana Clevelendii Gray. |
| 46 | 4-2-1-2-3- گياه توتون Nicotiana tabacum L. cv. Whiteburly |
| 46 | 4-2-1-2-4- گياه توتون Nicotiana debneyii L. |
| 46 | 4-2-1-2-5- گياه توتون Nicotiana tabacum var Samsun NN. |
| 46 | 4-2-1-2-6- گياه توتون Nicotiana tabacum L. cv. Turkish |
| 46 | 4-2-1-2-7- گياه داتوره.Datura maxima L |
| 47 | 4-2-1-2-8-گياه داتوره.Datura stramonium L |
| 47 | 4-2-2- بررسي علايم ايجاد شده بر روي گياهان مايه زني شده خانواده Compositaeae |
| 47 | 4-2-2-1- گل داوودي |
| 47 | 4-2-2-2- گل آهار |
| 48 | 4-2-2-3- گل آفتابگردان زينتي |
| 48 | 4-2-3- بررسي علايم ايجاد شده بر روي گياهان مايه زني شده خانواده Chenopodiaceae |
| 48 | 4-2-3-1- گونههاي کنوپودييوم |
| 48 | 4-2-3-2- گياه اسفناج |
| 48 | 4-2-4- بررسي علايم ايجاد شده بر روي گياهان مايه زني شده خانواده Cucurbitaceae |
| 49 | 4-2-4-1- گياه خيار رقم Peto Seed |
| 49 | 4-2-5- بررسي علايم ايجاد شده بر روي گياهان مايه زني شده خانواده Leguminosae |
| 49 | 4-2-5-1- گياه لوبيا چشم بلبلي رقم مشهد |
| 49 | 4-2-5-2- گياه لوبيا سبز رقم Sunrise |
| 49 | 4-3- استخراج Total RNA و آزمون RT-PCR |
| 50 | 4-4- همسانه سازي قطعات تکثير شده ژنوم جدايه هاي ايراني ويروس بي بذري گوجه فرنگي |
| 51 | 4-5- تعيين ترادف طول کامل ژنوم جدايه Ker.Mah.P و تعيين جايگاه تکاملي جدايههاي ايراني ويروس بي بذري گوجه فرنگي |
| فصل پنجم: بحث | |
| 52 | 5-1- بحث |
| 60 | منابع مورد استفاده |
| پيوستها | |
| جداول | |
| 68 | جدول 1-1- ميزبانان طبيعي ويروس بي بذري گوجه فرنگي |
| 69 | جدول 2-1- طبقه بندي ويروس بي بذري گوجه فرنگي |
| 69 | جدول 2-2- اسامي برخي از کشورهايي که ويروس بيبذري گوجه فرنگي از آنها گزارش گرديده است. |
| 70 | جدول 2-3- خصوصيات آر.ان.اي هاي ژنومي ويروس بي بذري گوجه فرنگي |
| 70 | جدول 3-1- استان هاي نمونه برداري شده در اين مطالعه طي سالهاي 90-88 |
| 71 | جدول3-2- نام علمي خانواده و گياهان نمونه برداري شده جهت شناسايي ويروس بي بذري گوجه فرنگي |
| 71 | جدول 3-3- نام خانواده هاي گياهاني که جهت تعيين دامنه ميزباني و شناسايي ويروس بي بذري گوجه فرنگي در اين تحقيق استفاده شدند. |
| 72 | جدول 3-4- نام گياهاني که جهت تعيين دامنه ميزباني و شناسايي ويروس بي بذري گوجه فرنگي استفاده شدند. |
| 73 | جدول 3-5- خصوصيات آغازگرهاي مورد استفاده جهت تکثير قطعه RNA-1 جدايه ايراني Ker.Mah.P مجزا شده از گياه اطلسي |
| 74 | جدول 3-6- خصوصيات آغازگرهاي مورد استفاده جهت تکثير قطعه RNA-2 جدايه ايراني Ker.Mah.P مجزا شده از گياه اطلسي |
| 74 | جدول 3-7- خصوصيات آغازگرهاي مورد استفاده جهت تکثير قطعه RNA-3 جدايه ايراني Ker.Mah.P مجزا شده از گياه اطلسي و ژن پروتئين پوششي جدايه Ker.Ker.Ch.1 مجزا شده از گياه داوودي |
| 75 | جدول 3-8- مواد لازم جهت ساختنcDNA در مرحله RT |
| 75 | جدول 3-9- مواد لازم جهت انجام آزمون PCR در يک واکنش 50 ميکروليتري |
| 76 | جدول 3-10- مواد مورد نياز جهت Ligation |
| 76 | جدول3-11- مواد مورد نياز جهت تهيه 100 ميلي ليترمحيط کشت جامد |
| 77 | جدول 3-12- مواد و مقادير مورد نياز جهت تهيه 100 ميليليتر بافر STET |
| 77 | جدول-3-13- مواد مورد نياز جهت هضم آنزيمي پلاسميد نوترکيب (Digestion) |
| 78 | جدول4-1- گياهان، مناطق نمونه برداري و ميزان آلودگي نسبت به ويروس بي بذري گوجه فرنگي |
| 79 | جدول4-2- جدايه هاي ايراني مورد بررسي در اين تحقيق همراه با حروف مخفف مورد استفاده |
| 79 | جدول 4-3- علائم ايجاد شده توسط جدايههاي ايراني ويروس بيبذري گوجه فرنگي بر روي گياهان آزمون |
| 81 | جدول 4-4- جدايه هاي مورد بررسي ويروس بيبذري گوجه فرنگي موجود در بانک ژن جهت مقايسه و رسم دندروگرام و تعيين جايگاه فيلوژنتيکي جدايه هاي ايراني اين ويروس |
| شکلها | |
| 83 | شکل 1-1- بد شکلي و پژمردگي گل داوودي در اثر آلودگي به ويروس بي بذري گوجه فرنگي |
| 83 | شکل 1-2- رنگ پريدگي و روشن شدن سطح پهنک برگ هاي داوودي در اثر آلودگي به ويروس بي بذري گوجه فرنگي |
| 83 | شکل 1-3- شکستگي رنگ گل گلايول، موزائيک شديد ولکه هاي نکروتيک ايجاد شده توسط ويروس بي بذري گوجه فرنگي |
| 84 | شکل 1-4- علائم لکه هاي کلروتيک و رنگ پريدگي برگ هاي گياه لوبيا ايجاد شده توسط ويروس بي بذري گوجه فرنگي |
| 84 | شکل 2-1- ساختار ژنوم گونههاي جنس کوکوموويروس |
| 85 | شکل 4-1- علائم بدشکلي در برگ هاي گياه داوودي ايجاد شده توسط ويروس بي بذري گوجه فرنگي جمع آوري شده از مناطق گلکاري شهر کرمان |
| 85 | شکل 4-2- علائم رنگ پريدگي سطح برگ هاي گياه داوودي ايجاد شده توسط ويروس بي بذري گوجه فرنگي جمع آوري شده از مناطق گلکاري شهر کرمان |
| 85 | شکل 4-3- علايم تاولي بر روي برگ هاي گياه گوجه فرنگي. مايه زني شده با جدايه Ker.Mah.P |
| 86 | شکل 4-4- علايم رنگ پريدگي بر روي برگ هاي گياه گوجه فرنگي. مايه زني شده با جدايه Ker.Mah.P |
| 86 | شکل 4-5- علايم بدشکلي بر روي برگ هاي گياه گوجه فرنگي مايه زني شده با جدايه Ker.Ker.Ch.1 |
| 86 | شکل 4-6- علايم رنگ پريدگي بر روي برگ هاي گياه فلفل مايه زني شده با جدايه Ker.Ker.Ch.1 |
| 87 | شکل 4-7- علايم Calico بر روي برگ هاي گياه فلفل مايه زني شده با جدايه Ker.Mah.P |
| 87 | شکل 4-8- علايم رنگ پريدگي و زردي بر روي برگ هاي گياه اطلسي مايه زني شده با جدايه Ker.Mah.P |
| 87 | شکل 4-9- علايم بدشکلي بر روي برگ هاي گياه اطلسي مايه زني شده با جدايه Ker.Mah.P |
| 88 | شکل 4-10- علايم موزائيک بر روي برگ هاي گياه اطلسي مايه زني شده با جدايه Ker.Ker.Ch.1 |
| 88 | شکل 4-11- علايم پيچک مانند شدن برگ ها بر روي برگ هاي گياه Nicotiana glutinosa L. مايه زني شده با جدايه Ker.Mah.P |
| 88 | شکل4-12- علايم پيچک مانند شدن برگ ها بر روي برگ هاي گياه Nicotiana glutinosa L. مايه زني شده با جدايه Ker.Ker.Ch.1 |
| 89 | شکل 4-13- علايم چينه داني بر روي سطح زيرين برگ هاي گياه Nicotiana glutinosa L. مايه زني شده با جدايه Ker.Mah.P |
| 89 | شکل 4-14- علايم تاولي شدن برگ ها بر روي برگ هاي گياه Nicotiana glutinosa L. مايه زني شده با جدايه Ker.Ker.Ch.1 |
| 89 | شکل 4-15- علايم چينه داني بر روي سطح زيرين برگ هاي گياه Nicotiana Clevelendii Gray. مايه زني شده با جدايه Ker.Mah.P |
| 90 | شکل 4-16- علايم رنگ پريدگي بر روي برگ گياهNicotiana Clevelendii Gray. مايه زني شده با جدايه Ker.Mah.P |
| 90 | شکل 4-17- گياه Nicotiana Clevelendii Gray. مايه زني شده با جدايه Ker.Mah.P |
| 91 | شکل 4-18- علايم نقش حلقوي بر روي برگ هاي گياه Nicotiana tabacum L. cv. مايه زني شده با جدايه Ker.Mah.P |
| 91 | شکل 4-19- علايم لکه هاي نکروتيک بر روي برگ گياه Nicotiana tabacum L. cv. Whiteburly. مايه زني شده با جدايه Ker.Mah.P |
| 91 | شکل 4-20- علايم سوزني شدن برگ هاي گياه Nicotiana tabacum L. cv. Whiteburly. مايه زني شده با جدايه Ker. Ker.Ch.1 |
| 92 | شکل 4-21- علايم چينه داني بر روي سطح زيرين برگ هاي گياه Nicotiana tabacum L. cv. Whiteburly. مايه زني شده با جدايه Ker.Ker.Ch.1 |
| 92 | شکل 4-22- علايم بد شکلي و لکه هاي نکروتيک بر روي سطح برگ هاي گياه Nicotiana tabacum L. cv. Whiteburly. مايه زني شده با جدايه Ker.Mah.P |
| 92 | شکل 4-23- علايم ماتل بر روي برگ هاي گياه Nicotiana debneyii L. مايه زني شده با جدايه Ker.Mah.P |
| 93 | شکل 4-24- علايم بدشکلي بر روي برگ هاي گياه Nicotiana debneyii L. مايه زني شده با جدايه Ker.Mah.P |
| 93 | شکل 4-25- گياه آلوده.Nicotiana debneyii L مايه زني شده با جدايه Ker.Mah.P |
| 93 | شکل 4-26- علايم ماتل بر روي برگ هاي گياه Nicotiana tabacum var Samsun NN مايه زني شده با جدايه Ker.Mah.P |
| 94 | شکل 4-27- علايم بدشکلي بر روي برگ هاي گياه Nicotiana tabacum var Samsun NN مايه زني شده با جدايه Ker. Ker.Ch.1 |
| 94 | شکل 4-28- گياه آلوده . Nicotiana tabacum L. cv. Turkish مايه زني شده با جدايه Ker.Mah.P |
| 94 | شکل 4-29- علايم چينه داني بر روي برگ هاي گياه Datura maxima L مايه زني شده با جدايه Ker.Mah.P |
| 95 | شکل 4-30- علايم موزائيک بر روي برگ هاي گياه Datura maxima L مايه زني شده با جدايه Ker.Mah.P |
| 95 | شکل 4-31- علايم بدشکلي بر روي برگ هاي گياه Datura maxima L مايه زني شده با جدايه Ker. Ker.Ch.1 |
| 95 | شکل4-32- علايم بدشکلي و ريز برگي بر روي برگ هاي گياه داوودي مايه زني شده با جدايه Ker.Mah.P |
| 96 | شکل4-33- علايم رگبرگ روشني بر روي برگ هاي گياه داوودي مايه زني شده با جدايه Ker.Mah.P |
| 96 | شکل4-34- علايم نکروز و بدشکلي بر روي برگ هاي گياه داوودي مايه زني شده با جدايه Ker.Mah.P مجزا شده ازگياه اطلسي |
| 96 | شکل4-35- علايم ماتل بر روي برگ هاي گياه داوودي مايه زني شده با جدايه Ker.Mah.P |
| 97 | شکل 4-36- علايم بدشکلي بر روي گل هاي گياه داوودي مايه زني شده با جدايه Ker.Mah.P |
| 97 | شکل 4-37- علايم بدشکلي بر روي گل هاي گياه داوودي مايه زني شده با جدايه Ker.Mah.P |
| 98 | شکل 4-38- پژمردگي گل گياه داوودي مايه زني شده با جدايه Ker.Mah.P |
| 98 | شکل 4-39- علايم شکستگي رنگ بر روي گلبرگ هاي گل گياه داوودي مايه زني شده با جدايه Ker.Mah.P |
| 99 | شکل 4-40- علايم لکه نکروتيک و بدشکلي بر روي برگ هاي گل آهار مايه زني شده با جدايه Ker.Mah.P |
| 99 | شکل 4-41- علايم کوتولگي و بدشکلي بر روي برگ هاي گل آفتابگردان زينتي مايه زني شده با جدايه Ker.Mah.P |
| 99 | شکل 4-42- علايم لکه هاي نکروتيک بر روي برگ هاي گياه Chenopodium amaranticolor Coste et Reyn مايه زني شده با جدايه Ker.Mah.P |
| 100 | شکل 4-43- علايم کوتولگي گياه اسفناج مايه زني شده با جدايه Ker.Mah.P |
| 100 | شکل 4-44- علايم بدشکلي بر روي برگ هاي گياه اسفناج مايه زني شده با جدايه KerKer.Ch.1 |
| 100 | شکل 4-45- علايم لکه هاي نکروتيک ولکه هاي کلروتيک بر روي برگ هاي گياه خيار رقم Peto Seed مايه زني شده با جدايه KerKer.Ch.1 |
| 101 | شکل 4-46- علايم لکه هاي کلروتيک بر روي برگ هاي گياه لوبيا چشم بلبلي رقم مشهد مايه زني شده با جدايه Ker.Mah.P |
| 101 | شکل 4-47- علايم بدشکلي و سوزني شدن برگ بر روي برگ هاي گياه لوبيا سبز رقم Sunrise مايه زني شده با جدايه Ker.Mah.P |
| 102 | شکل4-48- الكتروفورز محصول PCR تكثير شده با استفاده از آغازگرهاي اختصاصي R9/F1با باند 678 جفت بازي مربوط به ژن پروتئين پوششي جدايه هاي ايراني ويروس بی بذری گوجه فرنگی درون ژل آگاروز1% |
| 102 | شکل 4-49- الكتروفورز محصول PCR تكثير شده با استفاده از آغازگرهاي اختصاصي R5/F3 با باند 750 جفت بازي مربوط به ژن پروتئين حرکتي جدايه Ker.Mah.P درون ژل آگاروز1% |
| 103 | شکل 4-50- الكتروفورز محصول PCR تكثير شده با استفاده از آغازگرهاي اختصاصي R7/F6با باند 477 جفت بازي مربوط به ناحيه ICR قطعه RNA-3 جدايه Ker.Mah.P درون ژل آگاروز1% |
| 103 | شکل 4-51- الكتروفورز محصول PCR تكثير شده با استفاده از آغازگرهاي اختصاصيR76/F32 با باند 863 جفت بازي مربوط به ژن 2a جدايه Ker.Mah.P درون ژل آگاروز1% |
| 104 | شکل 4-52- الكتروفورز محصول PCR تكثير شده با استفاده از آغازگرهاي اختصاصي R43/F10با باند 1060 جفت بازي مربوط به ژن 2a جدايه Ker.Mah.P درون ژل آگاروز1% |
| 104 | شکل 4-53- الكتروفورز محصول PCR تكثير شده با استفاده از آغازگرهاي اختصاصي R111/F50 با باند 602 جفت بازي مربوط به ژن 2b جدايه Ker.Mah.P درون ژل آگاروز1% |
| 105 | شکل 4-54- الكتروفورز محصول PCR تكثير شده با استفاده از آغازگرهاي اختصاصي R31/F70با باند 689 جفت بازي مربوط به ژن 1a جدايه Ker.Mah.P درون ژل آگاروز1% |
| 105 | شکل 4-55- الكتروفورز محصول PCR تكثير شده با استفاده از آغازگرهاي اختصاصي R17/F93با باند 1010 جفت بازي مربوط به ژن 1a جدايه Ker.Mah.P درون ژل آگاروز1% |
| 106 | شکل 4-56- الکتروفورز پلاسميد نوترکيب حاوي قطعه ژن پروتئين پوششي جدايه هاي ايراني ويروس TAV هضم شده با آنزيم هاي EcoR1 و Pst1 درون ژل آگاروز1% |
| 106 | شکل 4-57- الکتروفورز پلاسميد نوترکيب حاوي قطعه ژن پروتئين حرکتي جدايه Ker.Mah.P هضم شده با آنزيم هاي EcoR1 و Pst1 درون ژل آگاروز1% |
| 107 | شکل 4-58- الکتروفورز پلاسميد نوترکيب حاوي قطعه 863 جفت بازي مربوط به ژن 2a جدايه Ker.Mah.P هضم شده با آنزيم هاي EcoR1 و Pst1 درون ژل آگاروز1% |
| 107 | شکل 4-59- الکتروفورز پلاسميد نوترکيب حاوي قطعه 1060 جفت بازي مربوط به ژن 2a جدايه Ker.Mah.P هضم شده با آنزيم هاي EcoR1 و Pst1 درون ژل آگاروز1% |
| 108 | شکل 4-60- الکتروفورز پلاسميد نوترکيب حاوي قطعه 899 جفت بازي مربوط به ژن 2a جدايه Ker.Mah.P هضم شده با آنزيم هاي EcoR1 و Pst1 درون ژل آگاروز1% |
| 108 | شکل 4-61- الکتروفورز پلاسميد نوترکيب حاوي قطعه 602 جفت بازي مربوط به ژن 2b جدايه Ker.Mah.P هضم شده با آنزيم هاي EcoR1 و Pst1 درون ژل آگاروز1% |
| 109 | شکل 4-62- الکتروفورز پلاسميد نوترکيب حاوي قطعه 1033 جفت بازي مربوط به ژن 1a جدايه Ker.Mah.P هضم شده با آنزيم هاي EcoR1 و Pst1 درون ژل آگاروز1% |
| 109 | شکل 4-63- الکتروفورز پلاسميد نوترکيب حاوي قطعه 1010 جفت بازي مربوط به ژن 1a جدايه Ker.Mah.P هضم شده با آنزيم هاي EcoR1 و Pst1 درون ژل آگاروز1% |
| 110 | شکل 4-64- شکل شماتيک قطعه RNA-3 جدايه ايراني Ker.Mah.P |
| 111 | شکل 4-65- شکل شماتيک قطعه RNA-2 جدايه ايراني Ker.Mah.P |
| 112 | شکل 4-66- شکل شماتيک قطعه RNA-1 جدايه ايراني Ker.Mah.P |
| 113 | شکل 5-1- مقايسه توالي انتها ي 3’UTR قطعه ي RNA-3 جدايه هاي ويروس بي بذري گوجه فرنگي و جدايه ايراني Ker.Mah.P |
| 113 | شکل 5-2- نوکلئوتيد سيتوزين حفاظت شده در ژن پروتئين حرکتي ويروس بي بذري گوجه فرنگي در جدايه هاي گزارش شده در دنيا و جدايه ايراني Ker.Mah.P |
| 114 | شکل 5-3- توالي حفاظت شده UG tract که در انتهاي ناحيه 5’UTR قطعه RNA-3 جدايه هاي ويروس بي بذري گوجه فرنگي و جدايه ايراني Ker.Mah.P |
| 114 | شکل5-4- توالي ناحيه کنترل داخلي (ICR) که در ناحيه بين ژني (Intergenic Region) قطعه RNA-3 جدايه ايراني Ker.Mah.P و ديگر جدايه هاي ويروس بي بذري گوجه فرنگي |
| 114 | شکل 5-5- توالي حفاظت شده در انتهاي 3’UTR جدايه هاي ويروس بي بذري گوجه فرنگي و جدايه ايراني Ker.Mah.P |
| 115 | شكل5-6- درخت فيلوژنتيكي رسم شده با استفاده ازترادف نوكلئوتيدي ژن پروتئين پوششي جدايه هاي ايراني ويروس بي بذري گوجه فرنگي و ساير جدايه هاي موجود در بانك ژن با استفاده از نرم افزار DNAMAN |
| 116 | شکل 5-7- مقايسه درصد همولوژي ترادف نوكلئوتيدي ژن پروتئين پوششي جدايههاي ايراني ويروس بي بذري گوجه فرنگي و جدايه هاي موجود در بانک ژن با استفاده از نرم افزار DNAMAN |
| 117 | شکل 5-8- مقايسه درصد همولوژي ترادف اسيد آمينه ژن پروتئين پوششي جدايههاي ايراني ويروس بي بذري گوجه فرنگي و جدايه هاي موجود در بانک ژن با استفاده از نرم افزار DNAMAN |
| 118 | شكل 5-9- درخت فيلوژنتيكي رسم شده با استفاده ازترادف نوكلئوتيدي ژن پروتئين حرکتي جدايه Ker.Mah.P و ساير جدايه هاي موجود در بانك ژن با استفاده از نرم افزار DNAMAN |
| 119 | شکل 5-10- مقايسه درصد همولوژي ترادف نوكلئوتيدي ژن پروتئين حرکتي جدايه Ker.Mah.P و ساير جدايه هاي موجود در بانك ژن با استفاده از نرم افزار DNAMAN |
| 119 | شکل5-11- مقايسه درصد همولوژي ترادف اسيد آمينه ژن پروتئين حرکتي جدايه Ker.Mah.P و ساير جدايه هاي موجود در بانك ژن با استفاده از نرم افزار DNAMAN |
| 120 | شكل 5-12- درخت فيلوژنتيكي رسم شده با استفاده ازترادف نوكلئوتيدي قطعه RNA-3 جدايه Ker.Mah.P و ساير جدايه هاي موجود در بانك ژن با استفاده از نرم افزار DNAMAN. |
| 121 | شکل 5-13- مقايسه درصد همولوژي ترادف نوكلئوتيدي قطعه RNA-3 جدايه Ker.Mah.P و ساير جدايه هاي موجود در بانك ژن با استفاده از نرم افزار DNAMAN |
| 121 | شکل 5-14- مقايسه درصد همولوژي ترادف اسيد آمينه قطعه RNA-3 جدايه Ker.Mah.P و ساير جدايه هاي موجود در بانك ژن با استفاده از نرم افزار DNAMAN |
| 122 | شکل 5-15-نواحی حفاظت شده RdRP در قطعه RNA-2 جدايه ايراني Ker.Mah.P و ساير جدايه هاي گزارش شده ويروس بي بذري گوجه فرنگي |
| 123 | شکل 5-16- نواحي حفاظت شده پروتئين 2b جدايه ايراني Ker.Mah.P و ساير جدايه هاي گزارش شده ويروس بي بذري گوجه فرنگي |
| 123 | شکل 5-17- توالي حفاظت شده در ناحيه 3’UTR قطعه RNA-2 جدايه ايراني Ker.Mah.P و ساير جدايه هاي گزارش شده ويروس بي بذري گوجه فرنگي |
| 124 | شكل 5-18- درخت فيلوژنتيكي رسم شده با استفاده ازترادف نوكلئوتيدي ژن 2a جدايه Ker.Mah.P و ساير جدايه هاي موجود در بانك ژن با استفاده از نرم افزار DNAMAN |
| 124 | شکل 5-19- مقايسه درصد همولوژي ترادف نوكلئوتيدي ژن 2a جدايه Ker.Mah.P و جدايه هاي موجود در بانک ژن با استفاده از نرم افزار DNAMAN |
| 124 | شکل 5-20- مقايسه درصد همولوژي ترادف اسيد آمينه ژن 2a جدايه Ker.Mah.P و جدايه هاي موجود در بانک ژن با استفاده از نرم افزار DNAMAN |
| 125 | شكل5-21- درخت فيلوژنتيكي رسم شده با استفاده ازترادف نوكلئوتيدي ژن 2b جدايه Ker.Mah.P و ساير جدايه هاي موجود در بانك ژن با استفاده از نرم افزار DNAMAN |
| 125 | شکل 5-22- مقايسه درصد همولوژي ترادف نوكلئوتيدي ژن 2b جدايه Ker.Mah.P و جدايه هاي موجود در بانک ژن با استفاده از نرم افزار .DNAMA |
| 125 | شکل 5-23- مقايسه درصد همولوژي ترادف اسيد آمينه ژن 2b جدايه Ker.Mah.P و جدايه هاي موجود در بانک ژن با استفاده از نرم افزار DNAMAN |
| 126 | شكل 5-24- درخت فيلوژنتيكي رسم شده با استفاده ازترادف نوكلئوتيدي قطعه RNA-2 جدايه Ker.Mah.P و ساير جدايه هاي موجود در بانك ژن با استفاده از نرم افزار DNAMAN |
| 126 | شکل5-25- مقايسه درصد همولوژي ترادف نوكلئوتيدي قطعه RNA-2 جدايه Ker.Mah.P و جدايه هاي موجود در بانک ژن با استفاده از نرم افزار DNAMAN |
| 126 | شکل5-26- مقايسه درصد همولوژي ترادف اسيد آمينه قطعه RNA-2 جدايه Ker.Mah.P و جدايه هاي موجود در بانک ژن با استفاده از نرم افزار DNAMAN |
| 127 | شکل 5-27- موتيف هاي حفاظت شده IV و V در ناحيه هليکاز قطعه RNA-1 جدايه ايراني Ker.Mah.P و ساير جدايه هاي گزارش شده ويروس بي بذري گوجه فرنگي |
| 127 | شکل 5-28- توالي حفاظت شده در ناحيه 3’UTR قطعه RNA-1 جدايه ايراني Ker.Mah.P و ساير جدايه هاي ويروس بي بذري گوجه فرنگي |
| 127 | شكل5-29- درخت فيلوژنتيكي رسم شده با استفاده ازترادف نوكلئوتيدي ژن1a جدايه Ker.Mah.P و ساير جدايه هاي موجود در بانك ژن با استفاده از نرم افزار DNAMAN |
| 128 | شکل 5-30- مقايسه درصد همولوژي ترادف نوكلئوتيدي ژن1a جدايه Ker.Mah.P و جدايه هاي موجود در بانک جهاني ژن با استفاده از نرم افزار DNAMAN |
| 128 | شکل 5-31- مقايسه درصد همولوژي ترادف اسيد آمينه ژن1a جدايه Ker.Mah.P و جدايه هاي موجود در بانک جهاني ژن با استفاده از نرم افزار DNAMAN |
| 129 | شكل 5-32- درخت فيلوژنتيكي رسم شده با استفاده ازترادف نوكلئوتيدي قطعه RNA-1 جدايه Ker.Mah.P و ساير جدايه هاي موجود در بانك ژن با استفاده از نرم افزار DNAMAN |
| 129 | شکل 5-33- مقايسه درصد همولوژي ترادف نوكلئوتيدي قطعه RNA-1 جدايه Ker.Mah.P و جدايه هاي موجود در بانک ژن با استفاده از نرم افزار DNAMAN |
| 129 | شکل 5-34- مقايسه درصد همولوژي ترادف اسيد آمينه قطعه RNA-1 جدايه Ker.Mah.P و جدايه هاي موجود در بانک جهاني ژن با استفاده از نرم افزار DNAMAN |
راهنمای خرید و دانلود فایل
برای پرداخت، از کلیه کارتهای عضو شتاب میتوانید استفاده نمائید.
بعد از پرداخت آنلاین لینک دانلود فعال و نمایش داده میشود ، همچنین یک نسخه از فایل همان لحظه به ایمیل شما ارسال میگردد.
در صورت بروز هر مشکلی،میتوانید از طریق تماس با ما پیغام بگذارید و یا در تلگرام با ما در تماس باشید، تا شکایت شما مورد بررسی قرار گیرد.
برای دانلود فابل روی دکمه خرید و دانلود کلیک نمایید.
ديدگاه ها