بررسی های آناستوموزی و تنوع ژنتیکی جدایه های R. solani عامل بیماری شانکر ساقه و شوره سیاه سیب زمینی : دانلود پایان نامه ارشد کشاورزی

کشور عزیزمان ایران با توجه به تنوع اقلیم ، آب و هوای مطبوع و اراضی وسیعی که در اختیار دارد در صورت مدیریت در عرصه کشاورزی میتواند یکی از قطب های بلامنازع کشاورزی دنیا باشد و با پرورش دانش آموختگان خبره در گرایش های مختلف رشته کشاورزی میتوان به این مهم نایل آمد.دیجی لود در ادامه به معرفی پایان نامه های کارشناسی ارشد رشته کشاورزی میپردازد. پایان نامه حاضر با عنوان”  بررسی های آناستوموزی و تنوع ژنتیکی جدایه های R. solani عامل بیماری شانکر ساقه و شوره سیاه سیب زمینی ” با گرایش بیماری شناسی گیاهی و با فرمت Word (قابل ویرایش) تقدیم شما دانشجویان عزیز میگردد.

چکیده بررسی های آناستوموزی و تنوع ژنتیکی جدایه های R. solani عامل بیماری شانکر ساقه و شوره سیاه سیب زمینی:

سیب زمینی با نام علمی(L. tuberosum (Solanum با سطح زیر کشت 18 میلیون هکتار پس از گندم، جو و برنج از مهم ترین محصولات کشاورزی در جیره ی غذایی به شمار می رود. بر اساس آمار منتشره، سطح زیر کشت سیب زمینی در ایران 173 هزار هکتار و میزان تولید آن 21/4 میلیون تن در سال برآورد شده است. هم اکنون، بیماری ریزوکتونیا در اثر solani Rhizoctonia از بیمار ی های مهم مزارع سیب زمینی کشور است که با علایم شانکر خشک و شوره سیاه ظاهر می شود و موجب کور شدن استولن ها می گردد. لذا، محصول را به شدت کاهش می دهد. به منظور بررسی ویژگی­های فنولوژیکی، مورفولوژیکی، آناستوموزی و هم چنین بیماری­زایی جدایه­های R. solani  ، 300 نمونه­ی آلوده از مناطق مهم سیب­زمینی کاری کشور شامل استان­های همدان، اردبیل، فارس، اصفهان، کردستان و کرمان جمع­آوری، جداسازی و خالص سازی شد، روند رشد جدایه­ها روی محیط کشت­ PDA ، تفاوت در رنگ کلنی­ جدایه­ها، تعیین قطر ریسه ها و میزان تولید اسکلروت بررسی گردید.

بررسی ها از نظر بیماری­زایی جدایه­ها روی گیاه سیب­زمینی، رقم مارفونا در شرایط گلخانه مورد مقایسه قرار گرفت. با توجه به اهمیت موضوع  بررسی هایی نیزدر خصوص تفاوت جدایه ها در تنوع ژنتیکی جدایه ها با استفاده از روش های مولکولی RAPD و  PCR-RFLP انجام گردید. برای تعيين گروه هاي آناستوموزی از نظر ژنتیکی در این مناطق، با استفاده از واکنش زنجیره ای PCR  از منطقه ITS ، آلودگي تعدادي از آن ها به بیماری رایزوکتونیا تاييد شد. سپس منطقه ی تکثیر شده  با آنزیم هایی مانند TaqI ,EcoRI ,AluI و چند آنزیم برشی دیگر مورد هضم آنزیمی قرار گرفت. براساس مقایسه ی الگوی برش آنزیمی، جدایه ها به چندگروه تقسیم شدند.

بررسی­های آزمایشگاهی نشان داد که در محیط کشت PDA  بیشترین میزان رشد متعلق به اصفهان 1 و کمترین مربوط به نمین 8 و اسدآباد 1 بوده است. رنگ کلنی­ جدایه­ها از کرم تا قهوه­ای تیره متفاوت بوده که شاخص موبوطه اثر معنی­دار داشت. هم­چنین، مشخص گردید که بیش ترین میزان تولید اسکلروت به ترتیب مربوط به سنندج 2 و کم ترین میزان متعلق به جیرفت 3، اقلید 4 و 5، آباده 1، کازرون 3، رزن 2، گلپایگان 2، سمیرم 3 و 4 و اصفهان 1 می­باشد. اندازه گیری قطر میسلیوم نشان داد که جدایه ی روستای نیاز(اردبیل) دارای بیشترین قطر و جدایه های سمیرم 3، گلپایگان 2 و اقلید 5 دارای کمترین قطر می باشند.

بررسی شاخص­ بیماری­زایی جدایه­ ها نیز تفاوت­های قابل توجه با اثری معنی­دار را نشان داد بدین ترتیب که بیشترین شدت بیماری متعلق به جیرفت 5 (86.1) و اصفهان 5 (80.55) و کمترین شدت بیماری متعلق به سمیرم 4 (15) و رزن 2 (33.3) اختصاص داده شد. مقایسه توالی های نوکلئوتیدی این جدایه ها با جدایه های موجود در بانک ژن نشان داد که جدایه های مرتبط به میزان 99% با توالی های ثبت شده مرتبط با رایزوکتونیا مشابهت دارند و بر مبنای واکنش های انجام شده جدایه های جمع آوری شده در چهار گروه آناستوموزی AG3، AG4، AG2، AG1 گروه بندی شدند. گروه غالب در میان جدایه های مورد بررسی، گروه آناستوموزی AG3 با 83.3 ٪ بود.

معرفی گیاه سیب زمینی و اهمیت آن

سيب زميني (Solanum tuberosum L.) محصول غذايي پراهميتي است كه به دليل سازگاري با شرايط محيطي متفاوت، پتانسيل باقي ماندن براي نسل ها را با توجه به افزايش جمعيت جهان داراست. سيب‌زميني از نظر مقدار تولید، چهارمین محصول جهان پس از گندم، برنج و ذرت می باشد Anon, 1985)).

اين محصول در ناحيه اي از كوه هاي آند واقع در آمريكاي جنوبي كشف شده است. ساكنين اين منطقه به گواهي باستان شناسان، هفت هزار سال پيش اين گياه را كشت و از ريشه ی مغذي آن به عنوان غذا استفاده مي كردند. اين محصول پرارزش حدود 250 سال بعد از رواج آن در اروپا، در زمان فتحعلي شاه قاجار وارد ايران شد (حیدرنیا، 1365). تحقيقات سيب زميني در ايران از سال 1339 با وارد نمودن ارقام مختلف از كشورهاي هلند، آلمان و انگلستان شروع گرديد.

براساس رده‌بندي Cronquist سيب‌زميني در فرمانرو گياهان، شاخه‌ی Angiosperms زيرشاخه‌ی Magnoliophyta رده‌ی Magnoliopsida زير رده‌ی Asteridae، راسته‌ی Solanales، تيره‌ی Solonaceae، جنس Solanum، گونه‌ی tuberosum با نام علمی tuberosum Solanum مي‌باشد(,Cronquist 1988).

از خانواده یSolanaceae ، فقط گونه ی Solanum tuberosum در سطح جهان كشت مي گردد و بقيه ی گونه هاي آن محدود به كوه هاي آند واقع در آمريكاي جنوبي مي باشد كه در اين مناطق گونه هاي وحشي از آن يافت مي شود. تغييرات جوي اخير در دنيا گونه هاي وحشي سيب زميني را در معرض خطر نابودي قرار داده است و تهديدي جدي بر عليه منابع ژنتيكي ارزشمند در مقابله با آفات گياهي و مقاومت در برابر خشكسالي به شمار مي آيد. چرا كه عوامل ژنتيكي يافت شده در گونه هاي وحشي منجر به توليد انواع جديدي از سيب زميني هاي غير وحشي و مقاوم مي شود كه مقاومت اين گياه را در برابر عوامل آسيب رسان افزايش مي دهد، طي پيش بيني كارشناسان در 50 سال آينده بيش از 60 درصد از اين گونه ها منقرض خواهند شد.

تاریخچه:

دانشمندان آمریکایی دریافته‌اند که سرمنشأ کلیه انواع سیب زمینی‌های امروزی را می‌توان در یک گیاه واحد که بیش از هفت هزار سال قبل در كشور پرورشد مي كرده ردگیری کرد (Sinkovec and Magdalena, 2004).

سیب­زمینی در حوالی سال 1570 توسط فاتحان اسپانیایی از آمریکای جنوبی به آن کشور منتقل شد و کشت آن در سراسر اروپا رواج یافت. سیب زمینی بعداً توسط مستعمره نشین‌های بریتانیایی به آمریکای شمالی منتقل شد(Hijmans, 2001).

براساس آمار و اسناد قدیمی ‌تاریخ ورود این گیاه به ایران به عهد قاجاریه می‌رسد(Laufer,1938). بعد از آن اطلاعاتي در ارتباط با چگونگي ورود ، انتقال و گسترش آن در سطح كشور در دست نيست تا اينكه ارقام پشندي و استانبولي در سطح نسبتا زيادي در مناطق كوهستاني شمال كشور كشت و کار شده است (George,1978). از سالهاي 1340 توسعه كشت سيب زميني در مناطق مختلف كشورشروع شده و در دهه 50 در اغلب استانها و مناطق، توليد آن توسعه يافته است و به عنوان سومين محصول بعد از گندم و برنج در تامين نشاسته مورد نياز در تغذيه مردم ایران قرار دارد(مجیدی و داوودی، 1382).

فهرست  مطالب

فهرست  مطالب… ‌ه

فهرست جدول ها ‌ل

فهرست شکل ها ‌م

چكيده: 1

فصل اول: مقدمه. 3

کلیات… 3

1-1-معرفی گیاه سیب زمینی و اهمیت آن. 3

1-2-تاریخچه: 3

1-3-گیاه شناسی سیب زمینی.. 4

1-3-1-ريشه. 4

1-3-2-ساقه. 4

1-3-3-استولون. 4

1-3-4-غده 5

1-3-5-جست… 5

1-3-6-برگ… 5

1-3-7-گل آذین.. 5

1-4- ارقام مختلف… 5

1-4-1- رقم‌هاى خيلى ‌زودرس و زودرس… 6

1-4-2- رقم‌هاى متوسط رس يا ميان‌رس… 6

1-4-3- رقم‌هاى ديررس… 6

1-5-الگوی رشد. 6

1-5-1-دوره ی قبل از سبز شدن و سبز شدن. 6

1-5-2-رشد برگ و ساقه. 7

1-5-3-رشد غده 7

1-6-ترکیبات موجود در سیب زمینی.. 7

1-7-طریقه کاشت و داشت سیب زمینی.. 7

1-8-شرایط خاک و میزان آب… 9

1-9-شرایط اکولوژیک… 10

1-10-خواص دارویی.. 10

1-11-اهمیت و توجیه اقتصادی سیب زمینی.. 11

1-12- بیماری های رایج.. 11

1-13-بيماري ريزوكتونيا 11

شکل1-1-الف: شانکر خشک ساقه   ب: شوره سیاه غده (وارتون و همکاران، 2009). 12

1-13-1-علايم بيماري.. 12

1-13-2-عامل بیماری.. 13

1-13-3- مشخصات مرفولوژیک R. solani 15

شکل1-2: قارچ R. solani (ویکیپدیا، 2011). 16

1-14-اهمیت اقتصادی بیماری.. 16

1-15-چرخه‌ی بیماری.. 17

شکل1-3-چرخه ی بیماری ریزوکتونیا توسط قارچR. solani((Whartonet al.,  2009. 18

1-16-روش های کنترل. 19

1-16-1-کنترل شیمیایی.. 19

1-16-2-کنترل بیولوژیکی.. 19

1-16-3-ارقام مقاوم. 20

1-17-ژنتیک مقاومت… 20

1-18- انواع مقاومت… 21

1-18-1-مقاومت عمودی.. 21

1-18-2-مقاومت افقی.. 21

1-19-تاریخچه بیماری.. 21

1-20- تحقیق.. 24

– بررسی رابطه ی نتايج داده های مولکولی و بيماری زايی جدايه ها. 24

فصل دوم: مواد و روش ها 25

2-1-مشخصات آب و هوایی منطقه. 25

2-2-محل اجرای آزمایشات… 25

2-3- مشخصات خاكشناسی منطقه. 25

2-4-ژنوتیپ های مورد آزمون. 26

2-5- طرح آماری مورد استفاده 26

2-6-آماده سازی مزرعه و گلخانه برای کشت… 26

2-6-1-تاریخ کاشت… 26

2-6-2-عملیات کاشت… 27

2-6-3-برداشت… 27

2-7- جامعه ي آماري.. 27

2-8-نمونه برداري و جداسازی قارچهای عامل بیماری: 27

2-9-محيط کشت های لازم برای جداسازی و خالص سازی قارچ: 28

2-9-1- محيط کشت آب– آگار(WA) : 28

2-9-2- محيط کشت سيب زميني، دکستروز، آگار (PDA): 28

2-9-3- محیط کشت مايع (PDB) : 29

2-10-خالص سازي قارچ به روش کشت مجدد: 29

2-11-نگهداري کشت خالص قارچ: 30

2-11-1- نگهداری قارچ عامل بیماری.. 30

2-12-بررسی آزمایشگاهی جدایه‌ها 31

2-12-1-اندازه گیری رشد شعاعی جدایه ها 31

2-12-2-تعیین قطر ریسه. 31

2-12-3-رنگ آمیزی هسته. 31

2-12-4-بررسی خصوصیات مرفولوژیکی جدایه ها 32

2-12-5-تعیین گروه های آناستوموزی جدایه ها 32

2-12-6-اثبات بیماری زایی.. 33

شکل2-1: شاخص بيماري شوره سیاه برحسب شدت و ضعف بيماري روي غده گیاه سيب‌زميني(Anon., 1985)  34

شکل2-2-: شاخص بيماري شانکر خشک برحسب شدت و ضعف بيماري روي ساقه گیاه سيب‌زميني   35

2-12-7- بررسی جدایه های Rhizoctonia از استولون های سیب زمینی و اثبات بیماری زایی آن ها بر روی گونه های  گیاهی دیگر. 35

2-13-تجزیه و تحلیل آماری.. 36

2-14-بررسی تنوع ژنتیکی جدایه ها 36

2-14-1-خالص کردن جدایه ها 37

2-14-2- تولید انبوه میسلیوم. 37

2-14-3-استخراج DNA.. 37

2-14-4-آنالیز نتایج حاصل از RAPD.. 41

2-14-5- آزمايش PCR – RFLP براي گروه بندي رایزوکتونیا 41

2-14-6 الکتروفورز محصول PCR-RFLP. 42

2-14-7 الکتروفورز محصول PCR-RFLP(محصول PCR تکثير يافته با آغازگرITS4_ITS5). 42

فصل سوم: نتایج.. 44

3-1- بررسی های آزمایشگاهی.. 44

3-1-1- روند رشد جدایه های قارچ عامل بیماری مورد آزمون. 44

3-1-2-تجزیه ی خوشه ای روند رشد جدایه های قارچی.. 45

شکل(3-1): دندروگرام روند رشد جدایه های قارچ عامل بیماری.. 47

3-1-3- مشاهدات رنگ کلونی قارچ عامل بیماری.. 47

3-1-4- تجزیه ی خوشه ای جدایه های رایزوکتونیا به تفکیک مشاهدات رنگ کلونی.. 48

شکل (3-2):  مقایسه رنگ کلونی جدایه های قارچ عامل بیماری.. 50

3-1-5- بررسی های میکروسکوپی ناشی از اندازه گیری قطر میسلیوم ها 50

3-1-6-تجزیه ی خوشه ای جدایه های عامل بیماری شوره سیاه بر اساس قطر میسلیوم. 51

شکل(3-3): مقایسه قطر میسلیومی جدایه های عامل شوره سیاه 53

3-1-8-تجزیه ی خوشه ای جدایه های عامل بیماری شانکر رایزوکتونیایی بر اساس مقدار تولید اسکلروت… 54

شکل(3-4): مقایسه‌ی مقدار تولید اسکلروت جدایه های قارچ عامل شانکر رایزوکتونیایی.. 56

3-2- مطالعه ی اثبات بیماریزایی جدایه ها 56

3-2-1- درصد آلودگی.. 57

3-2-2- تجزیه ی خوشه ای جدایه های رایزوکتونیا بر اساس درصد آلودگی.. 57

شکل(3-5): مقایسه ی درصد آلودگی جدایه های قارچ رایزوکتونیا 59

3-2-3- شدت بیماری.. 60

شکل(3-6): مقایسه‌ی شدت بیماری جدایه های قارچ عامل بیماری.. 62

3-2-5- شاخص بیماری.. 63

3-2-6- تجزیه ی خوشه ای جدایه های رایزوکتونیا بر اساس شاخص آلودگی.. 63

شکل(3-7): مقایسه ی شاخص بیماری جدایه های قارچ رایزوکتونیا 65

3-2-7- تجزیه ی خوشه ای جدایه های رایزوکتونیا بر اساس نمودار کلی درصد، شدت و شاخص بیماری.. 65

شکل(3-8): کلی درصد، شدت و شاخص بیماری جدایه های رایزوکتونیا 66

3-2-8- بررسی ضرایب همبستگی صفات کمی و کیفی جدایه های رایزوکتونیا 67

3-3- بررسی نتایج آناستوموزی بین جدایه های R.solani 68

3-3-1-مشخصات جدایه های R.solani  AG-3. 68

3-3-2-مشخصات جدایه های R.solani AG-4. 68

3-3-3- مشخصات جدایه های 2-AG    R.solani 69

3-3-4- مشخصات جدایه های 1-1 AG    R.solani 69

3-4- بررسی اثبات بیماری زایی جدایه های Rhizoctonia بر روی گونه های  گیاهی دیگر. 69

3-5- بررسی تنوع ژنتیکی قارچ Rhizoctonia solani سیب زمینی با استفاده از نشانگر RAPD.. 71

شکل (3-9-الف): الگوی باندی RAPD حاصل از تکثیر جدایه های 1 تا 15 قارچ Rhizoctonia solani 72

شکل (3-9-ب): الگوی باندی RAPD حاصل از تکثیر جدایه های 16 تا 30 قارچ Rhizoctonia solani 73

شکل (3-10): دندروگرام بدست آمده از بررسی نتایج  RAPDبا استفاده از روش UPGMA و ضریب جاکارد  74

استخراج DNA.. 75

شکل (3-11) : استخراج DNA از جدایه های مختلف رایزوکتونیاییM… 75

واکنش PCR از توالی های منطقه  ITS : 76

آنالیز RFLP- PCR جدایه های رایزوکتونیا و گروه بندی جدایه ها 77

فصل چهارم: بحث… 78

4- 1-بررسی های بیماری زایی جدایه ها 81

4-1-1- درصد آلودگی.. 81

4-1-2- شدت بیماری.. 81

4-1-3- شاخص بیماری.. 82

پيشنهادات: 84

پیوست ها 86

شکل (1)-تصاویر آلودگی غده ها ارقام مختلف سیب زمینی به بیماری شوره سیاه 88

شکل (2)-تصاویر مختلف آلودگی ساقه و استولون های سیب زمینی به بیماری شانکر ریزوکتونیایی ساقه  88

شکل (3)تنوع رنگ کلونی ها ی جدایه های رایزوکتونیا 89

شکل(4)مشاهده میکروسکوپی ریسه های قارچ رایزوکتونیا 89

شکل(5) ایجاد واکنش آناستوموزی جدایه های رایزوکتونیا روی پرگنه. 90

شکل(6)شکل میکروسکوپی سمت راست واکنش آناستوموزی از نوع C0 و شکل سمت چپ واکنش آناستوموزی از نوع C2. 90

شکل(7) مایه ی اینوکلوم اولیه جدایه ها برای تلقیح روی گونه های گیاهی جهت آزمایش گروه های آناستوموزی(AG)  91

شکل(8)گونه های گیاهی طالبی، چغندر، گوجه فرنگی و فلفل کاشته شده جهت اثبات آزمایش گروه های آناستوموزی(AG). 91

فهرست جدول ها

جدول (2-1) میانگین وضعیت دمایی و ساعات آفتابی در منطقه در ماه های بهمن تا مرداد. 24

(ایستگاه هواشناسی استان اصفهان). 24

جدول (2-2) نتایج تجزیه خاك مربوط به مزرعه و گلخانه. (آزمایشگاه خاك شناسی مركز تحقیقات كشاورزی اصفهان)  25

جدول(2-3): مقدار مواد استفاده شده برای هر واکنش PCR.. 38

جدول (2-4): چرخههای حرارتی بکار رفته در واكنش PCR.. 38

جدول(3-1): مقایسه روند رشد جدایه های قارچ عامل بیماری.. 45

جدول(3-2): مقایسه رنگ کلونی جدایه های قارچ عامل بیماری.. 48

جدول (3-3):  مقایسه قطر میسلیومی جدایه های قارچ عامل بیماری.. 51

جدول(3-4): مقایسه ی مقدار اسکلروت جدایه های قارچ عامل شانکر رایزوکتونیایی.. 55

جدول (3-5): مقایسه ی درصد آلودگی جدایه های قارچ رایزوکتونیا 57

جدول (3-6): مقایسه ی شدت بیماری جدایه های رایزوکتونیا 61

جدول (3-7): مقایسه ی شاخص بیماری جدایه های قارچ عامل بیماری.. 64

جدول(3-9): ضرایب همبستگی صفات کمی و کیفی جدایه های رایزوکتونیایی.. 67

جدول (3-4-الف): اثبات بیماری زایی AG3 بر طالبی.. 70

جدول (3-4- ب): اثبات بیماری زایی AG3 بر گوجه فرنگی.. 70

جدول (3-4- ج): اثبات بیماری زایی AG3 بر چغندر. 70

جدول (3-4-د): اثبات بیماری زایی AG3 بر فلفل.. 71

جدول پیوست: 1- جدول تجزیه واریانس اندازه کلونی روز اول. 85

جدول پیوست: 2- جدول تجزیه واریانس اندازه کلونی روز دوم. 85

جدول پیوست: 3- جدول تجزیه واریانس اندازه کلونی روز سوم. 85

جدول پیوست: 4- جدول تجزیه واریانس اندازه کلونی روز چهارم. 85

جدول پیوست: 5- جدول تجزیه واریانس رنگ کلونی.. 85

جدول پیوست: 6- جدول تجزیه واریانس مقدار اسکلروت… 86

جدول پیوست: 7- جدول تجزیه واریانس قطر میسلیوم. 86

جدول پیوست: 8- جدول تجزیه واریانس شدت بیماریزایی.. 86

جدول پیوست: 9- جدول تجزیه واریانس شاخص بیماریزایی.. 86

فهرست شکل ها

شکل(1-1):الف: شانکر خشک ساقه   ب: شوره سیاه غده (وارتون و همکاران، 2009). 11

شکل(1-2): قارچ R. solani (ویکیپدیا، 2011). 15

شکل(1-3):چرخه ی بیماری ریزوکتونیا توسط قارچR. solani((Whartonet al.,  2009. 17

شکل(2-1): شاخص بيماري شوره سیاه برحسب شدت و ضعف بيماري روي غده گیاه سيب‌زميني(Anon., 1985)  33

شکل(2-2): شاخص بيماري شانکر خشک برحسب شدت و ضعف بيماري روي ساقه گیاه سيب‌زميني.. 34

شکل(3-1): دندروگرام روند رشد جدایه های قارچ عامل بیماری.. 47

شکل(3-2): مقایسه رنگ کلونی جدایه های قارچ عامل بیماری.. 50

شکل(3-3): مقایسه قطر میسلیومی جدایه های عامل شوره سیاه 53

شکل(3-4): مقایسه‌ی مقدار تولید اسکلروت جدایه های قارچ عامل شانکر رایزوکتونیایی.. 56

شکل(3-5): مقایسه ی درصد آلودگی جدایه های قارچ رایزوکتونیا 59

شکل(3-6): مقایسه‌ی شدت بیماری جدایه های قارچ عامل بیماری.. 62

شکل(3-7): مقایسه ی شاخص بیماری جدایه های قارچ رایزوکتونیا3. 65

شکل(3-8): کلی درصد، شدت و شاخص بیماری جدایه های رایزوکتونیا 66

شکل (3-9-الف): الگوی باندی RAPD حاصل از تکثیر جدایه های 1 تا 15 قارچ Rhizoctonia solani 72

شکل (3-9-الف): الگوی باندی RAPD حاصل از تکثیر جدایه های 1 تا 15 قارچ Rhizoctonia solani 73

شکل (3-9-ب): الگوی باندی RAPD حاصل از تکثیر جدایه های 16 تا 30 قارچ Rhizoctonia solani 73

شکل (3-10): دندروگرام بدست آمده از بررسی نتایج RAPDبا استفاده از روش UPGMA و ضریب جاکارد. 74

شکل (3-11) : استخراج DNA از جدایه های مختلف رایزوکتونیایی.. 75

شکل (3-12) : تکثیر قطعه bp 700.≈ توسط جفت آغازگر ITS4/ITS5 از میزبان های  سیب زمینی جمع آوری شده مبتلا به بیماری رایزوکتونیاM :Ladder 100 plus. 77

شکل (1)-تصاویر آلودگی غده ها ارقام مختلف سیب زمینی به بیماری شوره سیاه 87

شکل (2)-تصاویر مختلف آلودگی ساقه و استولون های سیب زمینی به بیماری شانکر ریزوکتونیایی ساقه. 87

شکل (3)تنوع رنگ کلونی ها ی جدایه های رایزوکتونیا 88

شکل(4)مشاهده میکروسکوپی ریسه های قارچ رایزوکتونیا 88

شکل(5) ایجاد واکنش آناستوموزی جدایه های رایزوکتونیا روی پرگنه. 89

شکل(6)شکل میکروسکوپی سمت راست واکنش آناستوموزی از نوع C0 و شکل سمت چپ واکنش آناستوموزی از نوع C2  89

شکل(7) مایه ی اینوکلوم اولیه جدایه ها برای تلقیح روی گونه های گیاهی جهت آزمایش گروه های آناستوموزی(AG)  90

شکل(8)گونه های گیاهی طالبی، چغندر، گوجه فرنگی و فلفل کاشته شده جهت اثبات آزمایش گروه های آناستوموزی(AG)  90

راهنمای خرید و دانلود فایل

برای پرداخت، از کلیه کارتهای عضو شتاب میتوانید استفاده نمائید.

بعد از پرداخت آنلاین لینک دانلود فعال و نمایش داده میشود ، همچنین یک نسخه از فایل همان لحظه به ایمیل شما ارسال میگردد.

در صورت بروز  هر مشکلی،میتوانید از طریق تماس با ما  پیغام بگذارید و یا در تلگرام با ما در تماس باشید، تا شکایت شما مورد بررسی قرار گیرد.

برای دانلود فابل روی دکمه خرید و دانلود  کلیک نمایید.