تأثير خويش آميزي و زمان برداشت بر ميزان متابوليت هاي ثانويه رازيانه و بررسي تنوع ژنتيکي توده هاي آزاد گرده افشان و خودگرده افشان با استفاده از نشانگرهاي مورفولوژيک، آناتوميک و مولکولي : پایان نامه ارشد مهندسی کشاورزی زراعت و اصلاح نباتات

کشور عزیزمان ایران با توجه به تنوع اقلیم ، آب و هوای مطبوع و اراضی وسیعی که در اختیار دارد در صورت مدیریت در عرصه کشاورزی میتواند یکی از قطب های بلامنازع کشاورزی دنیا باشد و با پرورش دانش آموختگان خبره در گرایش های مختلف رشته کشاورزی میتوان به این مهم نایل آمد.دیجی لود در ادامه به معرفی پایان نامه های کارشناسی ارشد رشته کشاورزی میپردازد. پایان نامه حاضر با عنوان”  تأثير خويش آميزي و زمان برداشت بر ميزان متابوليت هاي ثانويه رازيانه و بررسي تنوع ژنتيکي توده هاي آزاد گرده افشان و خودگرده افشان با استفاده از نشانگرهاي مورفولوژيک، آناتوميک و مولکولي” با گرایش  کشاورزی زراعت و اصلاح نباتات و با فرمت Word (قابل ویرایش) تقدیم شما دانشجویان عزیز میگردد.

چکیده تأثير خويش آميزي و زمان برداشت بر ميزان متابوليت هاي ثانويه رازيانه و بررسي تنوع ژنتيکي توده هاي آزاد گرده افشان و خودگرده افشان با استفاده از نشانگرهاي مورفولوژيک، آناتوميک و مولکولي:

گياهان دارويي در ايران جزء ذخاير ژنتيکي ارزشمند محسوب مي­شوند. از جمله اين گياهان، گياه دارويي رازيانه با نام علمي (.Mill Foeniculum vulgare) از خانواده چتريان (Apiaceae)، چند ساله و از قديمي­ترين گياهان دارويي و ادويه­اي مي‌باشدکه در مناطق مختلف کشور کشت مي­شود. هدف از اجراي اين پژوهش، بررسي تأثير خويش­آميزي و زمان برداشت روي ميزان متابوليت­هاي ثانويه و بررسي تنوع ژنتيکي بين لاين­هاي خودگرده افشان و دگرگرده افشان جمعيت رازيانه­هاي ايراني و خارجي با استفاده از نشانگر­هاي مولکولي، مورفولوژيک و آناتوميک بوده است. علاوه بر اهداف ذکر شده، ترکيبات اصلي اسانس بذر هم به وسيله طيف سنجي کرماتوگرافي گازي مورد بررسي و مقايسه قرار گرفت. اين مطالعه به صورت آزمايش فاکتوريل در قالب طرح بلوک کامل تصادفي در سه تکرار در سال­هاي 93-1391 اجرا شد. در اين مطالعه 15 ترکيب نشانگري ISSR در توده­هاي دگرگرده افشان در مجموع، 248 نوار چند شکل توليد نمودند که 32/88 درصد آن­ها چند شکل بودند و PIC در حدود 43/0 حاصل شد در حالي­که در توده­هاي خودگرده افشان در مجموع 217 نوار چند شکل توليد نمودند که 32/82 درصد آن­ها چند شکل بودند و PIC در حدود 42/0 حاصل شد. داده­هاي حاصل از تجزيه و تحليل نرم افزار­هاي مولکولي با نشانگر ISSR، 23 توده دگرگرده افشان رازيانه را بر اساس مناطق جغرافيايي و اقليم منطقه به پنج گروه و 23 توده خودگرده افشان را به چهار گروه تقسيم کردند. تجزيه به مؤلفه‌هاي اصلي تعديل شده (PCoA) در هر دو حالت خودگرده افشاني و دگرگرده افشاني نيز در اکثر موارد نتايج تجزيه خوشه‌اي را تاييد نمود. نتايج حاصله از تجزيه واريانس داده­هاي مطالعات تشريحي بافت­هاي اندام­هاي رويشي (ساقه ودمبرگ) و زايشي (بذر) بيانگر وجود تنوع زيادي بين توده­هاي دگرگرده افشان و خودگرده افشان از نظر اکثر صفات مورد مطالعه بود. خويش­آميزي سبب افزايش ميانگين صفات فاصله غلاف­هاي آوندي کوچک تا اپيدرم شکمي ساقه، نسبت طول به عرض بذر و تعداد کانال ترشحي در ساختار بذر و ساقه شد. توده انگلستان با 46 و توده لهستان با 66/35 کانال ترشحي بيشترين ميزان اين صفت را به ترتيب در بين توده­هاي دگرگرده افشان و خودگرده افشان نشان دادند. نتايج نشان داد که ضريب تغييرات ژنتيکي در توده­هاي دگرگرده افشان براي صفات تعداد انشعاب فرعي، نسبت قطر تاج پوش به ارتفاع، نسبت ارتفاع به تعداد انشعاب فرعي، وزن هزاردانه و تعداد بذر در چتر کمتر از توده_­هاي خودگرده افشان برآورد شد. در حالي­که ضريب تغييرات فنوتيپي در توده­هاي خودگرده افشان براي صفات درصد سبز شدن، ارتفاع، تعداد انشعاب فرعي ، نسبت قطر تاج پوش به ارتفاع ، نسبت ارتفاع به تعداد انشعاب فرعي و تعداد بذر در چتر بيشتر از توده­هاي دگرگرده افشان برآورد شد. بيشترين مقدار وراثت پذيري عمومي در توده­هاي دگرگرده افشان مربوط به نسبت قطر تاج پوش به ارتفاع (74/99درصد) و بيشترين اين مقدار در توده­هاي خودگرده افشان مربوط به وزن هزاردانه (44/99درصد) بود. نتايج نشان مي­دهد که خويش­آميزي سبب افزايش ميانگين درصد اسانس، عملکرد عصاره، فنول تام، فلاونوئيد تام و افزايش فعاليت آنتي­اکسيداني شده است. در توده­هاي دگرگردهافشان توده شيروان بيشترين مقدار فنول تام(29/76) ميلي­گرم تانيک اسيد بر گرم ماده خشک، عملکرد عصاره(33/17درصد)، فلاونوئيد تام(49/14) ميلي­گرم کوئرستين بر گرم ماده خشک و بيشترين فعاليت آنتي­اکسيداني (29/76) ميکروگرم بر ميلي­ليتر حجم عصاره را نشان داد در حالي­که توده تبريز بيشترين عملکرد عصاره، فلاونوئيد تام و فعاليت آنتي اکسيداني را در توده­هاي خودگرده افشان داشت. ترکيب اصلي اسانس بذر رازيانه ترانس­آنتول است که بيشترين مقدار آن در توده اصفهان (38/90 %) و کم‌ترين آن در نمونه همدان (07/85 %) مشاهده شد. در توده­هاي دگرگرده افشان بيشترين و کمترين درصد اسانس به ترتيب به توده اصفهان (42/6 درصد) و توده­هاي اردبيل و بوشهر(4/2 درصد) اختصاص داشت. در حالي­که بيشترين و کمترين درصد اسانس در توده­هاي خودگرده افشان به ترتيب در توده­هاي همدان (50/6 درصد) و شيروان (5/3 درصد) مشاهده شد. مقايسه ميانگين داده­هاي تجزيه متابوليت­هاي ثانويه در مراحل مختلف رشد نشان داد که ميزان فنول کل و فعاليت آنتي­اکسيداني در بذر و ميوه بيشتر از گل، ساقه، برگ و دمبرگ بود. در حالي­که ميزان فلاونوئيد در بذر و برگ بيشتر از ساير بخش­هاي گياه بود. به­ طوري­که بالاترين ميزان فنول کل، ميزان فلاونوئيد و فعاليت آنتي­اکسيداني در بذر در مرحله اواخر رسيدگي بدست آمد.

1-1     مقدمه

برپا شدن نهضت جهاني «موج سبز» و بازگشت انسان به طبيعت و اعلام ممنوعيت سازمان بهداشت جهاني مبني بر استفاده از رنگ­ها و اسانس­هاي مصنوعي و عوارض جانبي دارو­هاي شيميايي در سال­هاي اخير، سبب رونق کشت و کار گياهان دارويي شده است. گياهان دارويي داراي اهميت اقتصادي فراوان بوده و به عنوان محصولات سود­آور تجاري شناخت شده­اند [14].

سرزمين ايران از نظر تنوع گياهي، به خصوص از منظر گياهان دارويي، جايگاه منحصر به فردي در جغرافياي گياهي جهان دارد. بر اساس نظر گياه‌شناسان و پژوهشگران علوم مرتبط منابع طبيعي، تعداد گونه‌هاي گياهي ايران حدود 8000 گونه است و تحقيقات دانش‌پژوهان كشور نشان داده است كه از اين تعداد بيش از 2500 گونه داراي خواص دارويي، عطري، ادويه‌اي، آرايشي و بهداشتي، رنگ دهنده، طعم دهنده، مكمل غذايي، كنترل كننده حشرات و علف هرز و ساير موارد هستند. به‌علاوه، از تعداد كل گونه‌هاي شناخته شده، نزديك 1730 گونه به عنوان گياهان بومي ايران (اندميك) مي‌باشند كه تنها در سرزمين ايران رويش كرده و به عنوان يك ظرفيت انحصاري در كشور محسوب مي‌شوند [6،21،22].

با توجه به اين که از نيمه دوم قرن گذشته در بيشتر کشورهاي جهان تحقيقات فارماکوديناميک[1] وسيع روي گياهان دارويي انجام گرفته و در ادامه دارو­هاي گياهي فراواني تهيه و به بازار عرضه گرديده است، مطالعه روي مواد مؤثره گياهان دارويي فلور غني ايران حائز اهميت است [4].

رازيانه يا باديان سبز گياهي از خانواده چتريان (Apiaceae) با نام علمي (.Mill Foeniculum vulgare)، ديپلوئيد، علفي، پايا، دو يا چند ساله، روز بلند، معطر، به ارتفاع يک تا دو متر که داراي برگ­هايي با بريدگي­هاي زياد است [4]. تعداد کروموزوم­هاي پايه در اين گياه 22=x2=n2 مي‌باشد [35]. ريشه­ها در رازيانه، غده­اي، دوکي شکل، مستقيم و به رنگ سفيد مات است. ساقه­ها استوانه­اي قائم، سبز روشن، منشعب و به ارتفاع 150 تا 200 سانتيمتر است. برگ­ها به رنگ سبز تيره، متناوب، ظريف و داراي بريدگي­هاي کم و بيش عميق هستند. گل­هاي کوچک و زرد رنگ گياه در انتهاي ساقه­هاي اصلي و فرعي و به صورت مجتمع در چتر مرکب قرار مي­گيرد. ميوه­ها دو فندوقه به طول 10-6 و عرض 3-2 ميلي­متر، دوکي شکل با دو انتهاي باريک به رنگ سبز يا قهوه­اي روشن مي‌باشد. چترها حاوي 25-18 گل نامساوي به طول 40-10ميلي­متر و دم گل‌ها 7-1 ميلي­متر طول دارد. [4، 44،54]. اين گياه در مناطق زيادي از اروپا، مديترانه و آسيا مي­رويد و از گياهان بومي اين مناطق به شمار مي­آيد [9،19، 22]. ظاهر کلي گياه رازيانه مخصوصاً برگ­هاي آن بي­شباهت به شويد و زيره نيست ولي بوي مطبوع، معطر، ساقه مرتفع و ريشه ضخيم گياه رازيانه به سهولت آن را از شويد و زيره متمايز مي­سازد. گل­هاي آن زرد رنگ و مجتمع به صورت چتر مرکب است. همه قسمت‌هاي گياه معطر بوده و قسمت­هاي مورد استفاده آن ريشه، برگ و بذر آن است ولي معمولاً کليه قسمت­ها مورد استفاده قرار مي­گيرد. ميوه رازيانه علاوه بر داشتن 10 تا 12 درصد ماده روغني، کمي هم ماده قندي موسيلاژ و اسانس داشته و داراي اِترهاي فنولي است که عامل اصلي خاصيت دارويي آن محسوب مي­شود. ميوه‌ها يا همان دانه­ي رازيانه حاوي دو تا شش درصد اسانس بوده و مهم‌ترين تركيبات آن شامل ترانس­آنتول[2]، ليمونن[3]، و فنچون[4] مي­باشد که بر حسب مرحله نمونه­برداري و شرايط محيطي و اقليمي موجود در هر اقليم و منطقه­اي متفاوت است [8]. اسانس رازيانه حاوي آنتول، استراگول، متيل اوژنول، فلاندرن، آلفاپينن، فنچون و … مي‌باشد. [43،58، 82].

1-1     اهداف اين پژوهش

• مقايسه ژنوتيپ­هاي مختلف گونه Foeniculum vulgare ايراني و اروپايي از نظر عملکرد اسانس و مقايسه ترکيبات اصلي اسانس بذر
• مقايسه ژنوتيپ­هاي مختلف از نظر فعاليت آنتي­اکسيداني و انتخاب بهترين زمان برداشت ژنوتيپ منتخب جهت دست­يابي به بالاترين فعاليت آنتي­اکسيداني
• بررسي تأثير خويش­آميزي و زمان برداشت بر ميزان متابوليت هاي ثانويه

بررسي تنوع ژنتيکي بين توده­هاي خودگرده افشان و آزاد گرده افشان رازيانه با استفاوه از نشانگرهاي مورفولوژيک، آناتوميک و مولکولي ISSR

فهرست مطالب

فصل اول:  مقدمه و بررسي منابع. 2

1-1                             کليات.. 2

1-2                      مقدمه.. 3

1-3                   انتشار جغرافيايي و اهميت اقتصادي رازيانه   4

1-4                       گياه‌شناسي رازيانه.. 5

1-4-1 معرفي تيره چتريان.. 5

1-4-2 معرفي جنس رازيانه.. 5

1-4-3 معرفي گونه­هاي رازيانه.. 5

1-5                                      ريخت شناسي (مورفولوژي).. 6

1-6          فنولوژي.. 6

1-7                     مصارف دارويي.. 7

1-8                                            نيازهاي اکولوژيکي گياه رازيانه.. 8

1-9                     نيازهاي زراعي.. 8

1-10                                     مواد و عناصر غذايي مورد نياز.. 9

1-11                  ترکيبات شيميايي.. 9

1-11-1 اسانس­ها.. 9

1-12                          ترکيبات فنوليک……….. 10

1-13                                استخراج ترکيبات فنوليک.. 11

1-13-1              استخراج با حلال.. 11

1-13-2                                                            استخراج توسط امواج اولتراسونيک……………. 11

1-13-3                 استخراج با کلونجر.. 12

1-14                                آنتي­اکسيدانها و اهميت آنها.. 12

1-15                                 طبقه بندي آنتي اکسيدان ها.. 13

1-16                  خودناسازگاري.. 13

1-17            خويش­آميزي.. 14

1-18                      اهداف خويش­آميزي.. 14

1-19                                  ژنتيک پسروي خويش­آميزي.. 14

1-20            تنوع ژنتيکي.. 14

1-21                                 اهميت بررسي تنوع ژنتيكي.. 15

1-22                                      روش‌هاي بررسي تنوع ژنتيکي.. 15

1-22-1           نشانگر ژنتيکي.. 15

1-22-2                            نشانگرهاي مورفولوژيک.. 16

1-22-3                     نشانگرهاي آناتوميک.. 16

1-22-4                       نشانگرهاي بيوشيميايي.. 16

1-22-5                    نشانگرهاي مولکولي.. 17

1-23                                         تقسيم­بندي نشانگرهاي مولکولي.. 17

1-23-1                        نشانگرهاي اختصاصي.. 17

1-23-2                   نشانگرهاي تصادفي.. 17

1-24       نشانگر ISSR.. 17

1-25                     كاربردهاي نشانگر ISSR.. 18

1-25-1                      مطالعات تنوع ژنتيكي.. 18

1-25-2             نقشه­يابي ژنتيكي.. 18

1-25-3                  نشانمند كردن ژن و انتخاب به كمك نشانگر   18

1-25-4                  مشخص ساختن فراواني توالي‌هاي ريزماهواره   18

1-25-5                   مطالعات جمعيت‌هاي طبيعي و تمايز گونه‌ها   18

1-26                               روش هاي تجزيه و تحليل.. 18

1-26-1           تجزيه خوشه­اي.. 19

1-26-2                             تجزية به مؤلفه‌هاي متعادل.. 19

1-27                             مطالعات ژنتيک جمعيت.. 19

1-28                       مطالعات انجام شده در زمينه خويش­آميزي   19

1-29                        مطالعات انجام شده روي رازيانه.. 20

1-30                     اهداف اين پژوهش.. 21

1-31                                جنبه­هاي جديد بودن طرح.. 21

فصل دوم:  مواد و روش­ها……… 22

2-1                         شماي کلي پژوهش.. 22

2-2                            موقعيت و ويژگي­هاي مکان آزمايش.. 22

2-3                مواد گياهي.. 22

2-4                   نحوه اجراي اين پژوهش.. 25

2-5                             بررسي تأثير خويش­آميزي بر روي صفات.. 25

2-6                                       صفات آناتومي مورد بررسي و نحوه اندازه­گيري آنها   25

2- صفات مورفولوژي مورد بررسي و نحوه اندازه­گيري آنها   28

2-8                                                      اندازه­گيري درصد اسانس و اجزاي آن.. 30

2-8-1 محاسبه درصد اسانس.. 30

2-8-2 تجزيه مواد مؤثره اسانس (اجزاي اسانس).. 30

2-9                                             اندازه­گيري فعاليت آنتي­اکسيداني.. 31

2-9-1 تهيه و عصاره­گيري گياه.. 31

2-9-2 تعيين ترکيبات فنولي.. 31

2-9-3 بررسي خاصيت آنتي­راديکالي به روش DPPH.. 31

2-9-4 ارزيابي فعاليت آنتي­اکسيداني به روش بي­رنگ شدن بتاکاروتن   32

2-9-5 بررسي قدرت احياءکنندگي آهن.. 32

2-9-6 اندازه­گيري محتوي تام فلاونوئيد عصاره‌ها.. 32

2-10                     بررسي تنوع ژنتيکي بين لاين­هاي خودگرده افشان و آزاد گرده افشان گياه رازيانه…………………..   32

2-10-1…………………….. استخراج DNA ژنومي از نمونه‌هاي گياهي.. 32

2-11                                    اندازه‌گيري كيفيت و کميت DNA.. 33

2-12                     اندازه‌گيري غلظت DNA توسط اسپكتروفتومتري.. 33

2-13                     اندازه‌گيري غلظت DNA توسط ژل آگارز.. 34

2-14       تکنيک ISSR.. 35

2-15                                تجزيه و تحليل‌هاي آماري.. 37

2-16                    تجزيه و تحليل داده­هاي آناتوميک، مورفولوژيک و فيتوشيميايي…………    37

فصل سوم:  نتايج و بحث………. 40

3-1                                 مقايسه ميانگين صفات مورد مطالعه در بخش آناتوميک ساقه   41

3-2                     تشريح ساقه در توده­هاي آزاد گرده افشان   41

3-3                       تشريح ساقه در توده­هاي خودگرده افشان   42

3-4                        تجزيه واريانس آناتوميک دمبرگ.. 51

3-5                               مقايسه ميانگين صفات آناتوميک دمبرگ.. 51

3-6                              تشريح دمبرگ در توده­هاي آزاد گرده افشان   51

3-7                               تشريح دمبرگ در توده­هاي خودگرده افشان.. 52

3-8                             تجزيه واريانس آناتوميک بذر.. 61

3-9                                               مقايسه ميانگين صفات مورد مطالعه در بخش آناتوميک بذر   61

3-9-1 طول بذر.. 61

3-9-2 عرض بذر.. 61

3-9-3 نسبت طول به عرض بذر.. 61

3-9-4 ضخامت اپيکارپ.. 61

3-9-5 تعداد لايه اپيکارپ.. 62

3-9-6 حاشيه سطح ديواره سلولي آنتي­کلينال.. 62

3-9-7 تعداد لايه ديواره سلولي پري­کلينال.. 62

3-9-8 ضخامت کوتيکول.. 62

3-9-9 تعداد لايه کوتيکول.. 63

3-9-10                                ضخامت پارانشيم مزوکارپ.. 63

3-9-11                                 تعداد لايه پارانشيم مزوکارپ.. 63

3-9-12                                     تعداد دستجات آوندي مزوکارپ.. 63

3-9-13                                       اندازه دستجات آوندي مزوکارپ.. 63

3-9-14                 تعداد کانال ترشحي.. 64

3-9-15                    تعداد لايه پوشش بذر.. 64

3-9-16                  تعداد لايه اندوکارپ.. 64

3-9-17                 تعداد لايه آندوسپرم.. 64

3-10                      مقايسه ميانگين نتايج حاصل از پسروي خويش­آميزي بر روي صفات آناتومي ساقه   70

3-11            مقايسه ميانگين نتايج حاصل از پسروي خويش­آميزي بر روي صفات آناتومي دمبرگ   74

3-12                        مقايسه ميانگين نتايج حاصل از پسروي خويش­آميزي بر روي صفات آناتومي بذر   78

3-13                  تجزيه خوشه­اي.. 81

3-14                  تجزيه به عامل­ها.. 84

3-14-1                                               تجزيه به عامل­هاي صفات آناتومي مرتبط با ساقه   84

3-14-2                                          تجزيه به عامل­هاي صفات آناتومي مرتبط با دمبرگ   88

3-14-3               تجزيه به عامل­هاي صفات آناتومي مرتبط با بذر   93

3-15                                ارزيابي صفات مورفولوژي در توده­هاي آزاد گرده افشان و خودگرده افشان   104

3-16                                            آماره­هاي توصيفي، برآورد ضرايب تغييرات فنوتيپي، ژنوتيپي و وراثت پذيري عمومي   104

3-17                                                تجزيه واريانس صفات مورفولوژيک.. 107

3-17-1            درصد سبز شدن.. 107

3-17-2 ارتفاع.. 107

3-17-3                  تعداد انشعاب فرعي.. 107

3-17-4      قطر گل­آذين.. 108

3-17-5       قطر تاج­پوش.. 108

3-17-6      وزن تر بوته.. 108

3-17-7             وزن خشک بوته.. 108

3-17-8                                   نسبت قطر تاج پوش به ارتفاع.. 109

3-17-9                                             نسبت ارتفاع به تعداد انشعاب فرعي.. 109

3-17- تعداد روز تا 50 درصد سبز شدن.. 109

3-17-11                                   تعداد روز تا 50 درصد گل‌دهي.. 110

3-17-12       وزن هزار دانه.. 110

3-17-13          تعداد بذر در چتر.. 110

3-17-14                عملکرد دانه در بوته.. 110

3-17-15                   شاخص خودسازگاري.. 111

3-18                                                                                                               مقايسه ميانگين نتايج حاصل از پسروي خويش­آميزي بر روي صفات مورفولوژي   116

3-19                                    گروه­بندي (تجزيه خوشه­اي).. 120

3-20                                             تجزيه واريانس صفات فيتوشيميايي.. 126

3-20-1        درصد اسانس.. 126

3-20-2            عملکرد عصاره.. 126

3-20-3 فنول تام.. 127

3-20-4      فلاونوئيد تام.. 127

3-20-5      آنتي­اکسيدان  (IC₅₀) 127

3- مقايسه ميانگين نتايج حاصل از پسروي خويش­آميزي بر روي صفات فيتوشيميايي   130

3-22                         ترکيبات اصلي اسانس.. 132

3- همبستگي بين ترکيبات و عملکرد اسانس در رازيانه   136

3- تيپ­هاي شيميايي توده­هاي رازيانه بر اساس ترکيبات اصلي اسانس   138

3- تجزيه عامل­هاي ترکيبات اصلي اسانس بذر   139

3- همبستگي صفات آناتوميک، مورفولوژيک و فيتوشيميايي 140

3- ارزيابي فعاليت آنتي­اکسيداني توده­ها.. 143

3-28                                                                                     روش به دام­اندازي راديکال 1و1- دي­فنيل-2-پيکريل­هيدرازيل   143

3-29                                آزمون قدرت احياکنندگي.. 143

3-30                                    روش بي­رنگ شدن بتاکاروتن.. 144

3-31                                                                                                                همبستگي بين ترکيبات فنوليک و سه مدل سيستم سنجش ظرفيت آنتي­اکسيداني 148

3-32                   مطالعات فنولوژي.. 149

3-33                                                                                                                            بررسي همبستگي بين پارامترهاي اندازه­گيري شده در مراحل مختلف نمونه­برداري گياه.. 152

3-34                                                                                                                                     بررسي تنوع بين توده­هاي خودگرده افشان و آزاد گرده افشان رازيانه با استفاده از نشانگرISSR   156

3-34-1 استخراج DNA ژنومي.. 156

3-35                                                                         الگوي نواري آغازگرها در توده­هاي خودگرده افشان   158

3-36                         تجزيه خوشه­اي……. 163

3-37                                  ضريب همبستگي کوفنتيک.. 163

3-38                          ترسيم نمودارخوشه­اي.. 163

3-39                       تجزيه به مؤلفه­هاي اصلي تعديل شده (PCoA)   167

3-40                  ساختار ژنتيکي.. 169

3-41                                                                                              مقايسه نمودار خوشه­اي توده­ها بر اساس داده­هاي حاصل از نشانگر ISSR، صفات مورفولوژيک و آناتومي.. 171

فصل چهارم:  نتيجه­گيري و پيشنهادها. 174

4-1                     نتيجه­گيري کلي.. 174

4-2                        مطالعات آناتوميک.. 175

4-3                              مطالعات مورفولوژيک.. 176

4-4                                         مطالعات فيتوشيميايي(اسانس).. 177

4-5                                                                                    بررسي ترکيبات فنوليک، فلاونوئيد و فعاليت آنتي­اکسيداني   178

4-6                      مطالعات فنولوژي.. 179

4-7                     نتايج مقايسه­اي.. 179

4-8                     مطالعه مولکولي.. 180

4-9          پيشنهادها.. 181

فهرست جداول

جدول 2-1: معرفي خصوصيات زمين مورد کشت. 22

جدول 2-2: مشخصات 23 توده رازیانه 26

جدول 2-3: صفات آناتومي مرتبط با ساقه و دمبرگ مورد بررسي 28

جدول 2-4: صفات آناتومي مرتبط با بذر مورد بررسي. 27

جدول2-5: توالي آغازگرهاي ISSR مورد استفاده در بررسي تنوع ژنتيکي توده هاي رازيانه  35

جدول 2-6 : اجزاء واکنش PCR  و مقدار هر يك از آنها براي تهيه محلول پايه  36

جدول 2-7: برنامه PCR براي تکثير DNA ژنومي با نشانگر ISSR.. 36

جدول 2-8: اميد رياضي مربوط به منابع تغييرات طرح آزمايشي انجام شده در اين مطالعه  37

جدول3- 1: تجزيه واريانس صفات آناتوميک ساقه براي دو حالت آزاد گرده افشاني و خودگرده افشاني  70

جدول3- 2: ادامه تجزيه واريانس صفات آناتوميک ساقه براي دو حالت آزاد گرده افشاني و خودگرده افشاني  71

جدول3- 3:  ادامه تجزيه واريانس صفات آناتوميک ساقه براي دو حالت آزاد گرده افشاني و خودگرده افشاني  72

جدول3- 4: مقايسه ميانگين صفات آناتومي ساقه توده­هاي مورد مطالعه رازيانه  73

جدول3- 5: ادامه مقايسه ميانگين صفات آناتومي ساقه توده­هاي مورد مطالعه رازيانه  74

جدول3- 6: ادامه مقايسه ميانگين صفات آناتومي ساقه توده­هاي مورد مطالعه رازيانه  75

ادامه جدول3-7: مقايسه ميانگين صفات آناتومي ساقه توده­هاي مورد مطالعه رازيانه  76

جدول3-8: تجزيه واريانس صفات آناتوميک دمبرگ براي دو حالت آزاد گرده افشاني و خودگرده افشاني  54

جدول3-9: ادامه تجزيه واريانس صفات آناتوميک دمبرگ براي دو حالت آزاد گرده افشاني و خودگرده افشاني  55

جدول3-10: ادامه تجزيه واريانس صفات آناتوميک دمبرگ براي دو حالت آزاد گرده افشاني و خودگرده افشاني  56

جدول3-11: مقايسه ميانگين صفات آناتومي دمبرگ توده­هاي مورد مطالعه رازيانه  57

جدول3-12: مقايسه ميانگين صفات آناتومي دمبرگ توده­هاي مورد مطالعه رازيانه  58

جدول3-13: مقايسه ميانگين صفات آناتومي دمبرگ توده­هاي مورد مطالعه رازيانه  59

جدول3-14: مقايسه ميانگين صفات آناتومي دمبرگ توده­هاي مورد مطالعه رازيانه  60

جدول3-15: تجزيه واريانس صفات آناتوميک بذر براي دو حالت آزاد گرده افشاني و خودگرده افشاني  65

جدول3-16: ادامه تجزيه واريانس صفات آناتوميک بذر براي دو حالت آزاد گرده افشاني و خودگرده افشاني  66

جدول3-17: مقايسه ميانگين صفات آناتومي بذر توده­هاي مورد مطالعه رازيانه  67

جدول3-18: ادامه مقايسه ميانگين صفات آناتومي بذر توده­هاي مورد مطالعه رازيانه  69

جدول3-19: ادامه مقايسه ميانگين صفات آناتومي بذر توده­هاي مورد مطالعه رازيانه  70

جدول 3-20: نتايج حاصل از برآورد ميزان پسروي خويش­آميزي در توده­هاي رازيانه براي صفات آناتوميک  ساقه. 71

جدول3-21: ادامه نتايج حاصل از برآورد ميزان پسروي خويش­آميزي در توده­هاي رازيانه براي صفات آناتوميک ساقه. 72

جدول3-22: ادامه نتايج حاصل از برآورد ميزان پسروي خويش­آميزي در توده­هاي رازيانه براي صفات آناتوميک ساقه. 73

جدول3-23: نتايج حاصل از برآورد ميزان پسروي خويش­آميزي در توده­هاي رازيانه براي صفات آناتوميک دمبرگ  75

جدول3-24: ادامه نتايج حاصل از برآورد ميزان پسروي خويش­آميزي در توده­هاي رازيانه براي صفات آناتوميک دمبرگ. 76

جدول3-25: ادامه نتايج حاصل از برآورد ميزان پسروي خويش­آميزي در توده­هاي رازيانه براي صفات آناتوميک دمبرگ. 77

جدول3-26: نتايج حاصل از برآورد ميزان پسروي خويش­آميزي در توده­هاي رازيانه براي صفات آناتوميک بذر  79

جدول3-27: ادامه نتايج حاصل از برآورد ميزان پسروي خويش­آميزي در توده­هاي رازيانه براي صفات آناتوميک بذر. 80

جدول3-28: تجزيه عامل‌ها صفات آناتومي مرتبط با ساقه در توده­هاي آزاد گرده افشان رازيانه  86

جدول3-29: تجزيه عامل‌ها صفات آناتومي مرتبط با ساقه در توده­هاي خودگرده افشان رازيانه  87

جدول3-30: تجزيه عامل‌ها صفات آناتومي مرتبط با دمبرگ در توده­هاي آزاد گرده افشان رازيانه  90

جدول3-31: تجزيه عامل‌ها صفات آناتومي مرتبط با دمبرگ در توده­هاي خودگرده افشان رازيانه  91

ادامه جدول3-31: تجزيه عامل‌ها صفات آناتومي مرتبط با دمبرگ در توده­هاي خودگرده افشان رازيانه  92

جدول3-32: تجزيه عامل‌ها صفات آناتومي مرتبط با بذر در توده­هاي آزاد گرده افشان  94

جدول3-33: تجزيه عامل‌ها صفات آناتومي مرتبط با بذر در توده­هاي خودگرده افشان  95

جدول3-34: آماره­هاي توصيفي صفات موفولوژيک اندازه­گيري شده توده­هاي آزاد گرده افشان و خودگرده افشان رازيانه. 106

جدول3-35: ادامه آماره­هاي توصيفي صفات موفولوژيک توده­هاي آزاد گرده افشان و خودگرده افشان رازيانه  106

جدول3-36: تجزيه واريانس صفات مورفولوژيک براي دو حالت آزاد گرده افشاني و خودگرده افشاني رازيانه  112

جدول3-37: ادامه تجزيه واريانس صفات مورفولوژيک براي دو حالت آزاد گرده افشاني و خودگرده افشاني رازيانه. 112

جدول3-38: مقايسه ميانگين صفات مورفولوژي در توده­هاي آزاد گرده افشان و خودگرده افشان رازيانه  113

جدول3-39: ادامه مقايسه ميانگين صفات مورفولوژي در توده­هاي آزاد گرده افشان و خودگرده افشان رازيانه. 114

جدول3-40: ادامه مقايسه ميانگين صفات مورفولوژي در توده­هاي آزاد گرده افشان و خودگرده افشان رازيانه. 115

جدول 3-41: نتايج حاصل از برآورد ميزان پسروي خويش­آميزي در توده­هاي رازيانه براي صفات مورفولوژيک  155

جدول3-42: ادامه نتايج حاصل از برآورد ميزان پسروي خويش­آميزي در توده­هاي رازيانه براي صفات مورفولوژيک. 156

جدول3-43: تجزيه عامل‌هاي صفات مورفولوژي در توده­هاي آزاد گرده افشان رازيانه  125

جدول3-44: تجزيه عامل‌هاي صفات مورفولوژي در توده­هاي خودگرده افشان رازيانه  124

جدول3-45: تجزيه واريانس صفات فيتوشيميايي براي دو حالت آزاد گرده افشاني و خودگرده افشاني در رازيانه  128

جدول3-46: مقايسه ميانگين صفات فيتوشيميايي در توده­هاي آزاد گرده افشان و خودگرده افشان رازيانه  129

جدول3-47: نتايج حاصل از برآورد ميزان پسروي خويش­آميزي در توده­هاي رازيانه براي صفات فيتوشيميايي  131

جدول3-48: ترکيبات اصلي اسانس بذر رازيانه با GC/MS. 133

ادامه جدول3-48: ترکيبات اصلي اسانس بذر رازيانه با GC/MS. 134

جدول3-49: همبستگي ترکيبات اصلي اسانس 23 نمونه شيميايي رازيانه. 137

جدول3-50: تجزیه عامل­های ترکیبات اصلی اسانس بذر. 139

جدول3-51: همبستگي صفات مورفولوژيک، فيتوشيميايي و آناتوميک 23 نمونه شيميايي رازيانه حالت آزاد گرده افشاني. 141

جدول3-52: همبستگي صفات مورفولوژيک، فيتوشيميايي و آناتوميک 23 نمونه شيميايي رازيانه حالت خودگرده افشاني. 142

جدول3-53: همبستگي بین پارامترهای مختلف اندازه­گیری شده در مراحل مختلف نمونه برداری گیاه رازیانه  152

جدول 3-54: اطلاعات مربوط به نشانگرهاي حاصل از تجزيه ISSR در توده­هاي آزاد گرده افشان رازيانه  157

جدول 3-56: اطلاعات نشانگرهاي مورد مطالعه در ارزيابي تنوع ژنتيکي ميان توده­هاي آزاد گرده افشان رازيانه  160

جدول 3-57: اطلاعات نشانگرهاي مورد مطالعه در ارزيابي تنوع ژنتيکي ميان توده­هاي خودگرده افشان رازيانه. 161

جدول3-58: تجزيه واريانس مولکولي در 23 توده آزاد گرده افشان رازيانه مفروض در دو گروه کلي  170

جدول 3-59: اطلاعات مربوط به مکان­هاي چند شکل، هتروزيگوسيتي موردانتظار در توده­هاي آزاد گرده افشان رازيانه . 170

جدول3-60: تجزيه واريانس مولکولي در 23 توده خودگرده افشان رازيانه مفروض در دو گروه کلي  171

جدول 3-61: اطلاعات مربوط به مکان­هاي چند شکل، هتروزيگوسيتي موردانتظار در توده­هاي خود گرده افشان رازيانه . 171

فصل چهارم:  نتيجه­گيري و پيشنهادها. 174

فهرست اشکال

شکل3-1 ساختمان کانال ترشحي در دمبرگ رازيانه 55

شکل3-2: نتايج گروه­بندي توده­هاي رازيانه بر اساس صفات آناتومي  الف) آزاد گرده افشاني و ب) خود گرده افشاني. 83

شکل3-3: نتايج گروه­بندي توده­هاي رازيانه بر اساس صفات مورفولوژی  الف) آزاد گرده افشاني و ب) خود گرده افشاني 121

شکل 3-4: شماي کلي از توده­هاي الف) ديررس و پابلند ب) زودرس و پاکوتاه  125

شکل3-5: الف) نمونه کروماتوگرام  و ب) نمونه اسپکتروم بدست­آمده از آناليز ترکيبات اصلي اسانس بذر رازيانه. 135

شکل3-6: نمودار خوشه­اي 23 توده رازيانه مورد مطالعه بر اساس ترکيبات اصلي اسانس  138

شکل3-7: تغييرات درصد بازدارندگي راديکال آزاد DPPH توسط عصاره توده­هاي مختلف آزاد گرده افشان رازيانه  145

شکل3-8: تغييرات درصد بازدارندگي راديکال آزاد DPPH توسط عصاره توده­هاي مختلف خود گرده افشان رازيانه  145

شکل3-9: مقايسه قدرت احياءکنندگي آهن توسط عصاره توده­هاي مختلف رازيانه آزاد گرده افشان  146

شکل3-10: مقايسه قدرت احياءکنندگي آهن توسط عصاره توده­هاي مختلف رازيانه خودگرده افشان  146

شکل3-11: مقايسه قدرت آنتي­اکسيداني عصاره توده هاي مختلف رازيانه آزاد گرده افشان به روش بتاکاروتن  147

شکل3-12: مقايسه قدرت آنتي­اکسيداني عصاره توده هاي مختلف رازيانه خودگرده افشان به روش بتاکاروتن  147

شکل3-13: (الف ، ب و ج) همبستگي فنول تام و سه مدل سيستم سنجش ظرفيت آنتي­اکسيداني  148

شکل3-14(الف-ي): محتواي برخي آنتي­اکسيدان­هاي غيرآنزيمي گياه رازيانه در مراحل مختلف نمونه­برداري  151

شکل3-15: تغييرات درصد بازدارندگي راديکال آزاد DPPH در طي مراحل فنولوژي رازيانه  153

شکل3-16: مقايسه قدرت احياءکنندگي آهن در طي مراحل فنولوژي رازيانه  153

شکل3-17: مقايسه قدرت آنتي­اکسيداني رازيانه در طي مراحل فنولوژي به روش بتاکاروتن  193

شکل 3-19: نمونه­اي از ژل آگارز يک درصد TAE جهت تعيين کميت و کيفيت DNA   156

شکل 3-20: الگوي نواري آغازگر 12 در برخي از توده­هاي رازيانه.. 162

شکل3-21: الگوي نواري آغازگر 6 در برخي از توده­هاي رازيانه.. 162

شکل3-22: گروه­بندي توده­هاي آزاد گرده افشان رازيانه مورد مطالعه بر اساس ضريب Jacard   165

شکل3-23: گروه­بندي توده­هاي خودگرده افشان رازيانه مورد مطالعه بر اساس ضريب Jacard   166

شکل3-24: نمودار تجزيه به مؤلفه­هاي اصلي تعديل شده دوبعدي براي 23 توده آزادگرده افشان رازيانه  168

شکل3-25: نمودار تجزيه به مؤلفه­هاي اصلي تعديل شده دوبعدي براي 23 توده خودگرده افشان رازيانه  168

راهنمای خرید و دانلود فایل

برای پرداخت، از کلیه کارتهای عضو شتاب میتوانید استفاده نمائید.

بعد از پرداخت آنلاین لینک دانلود فعال و نمایش داده میشود ، همچنین یک نسخه از فایل همان لحظه به ایمیل شما ارسال میگردد.

در صورت بروز  هر مشکلی،میتوانید از طریق تماس با ما  پیغام بگذارید و یا در تلگرام با ما در تماس باشید، تا شکایت شما مورد بررسی قرار گیرد.

برای دانلود فابل روی دکمه خرید و دانلود  کلیک نمایید.